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2015年  46卷  第1期

论著
摘要:
目的 探讨利用自体骨髓间充质干细胞(BMSCs)复合膀胱去细胞基质(BAMG)进行犬膀胱缺损修复重建的可行性。方法 25只杂种犬,5只用于制备BAMG,20只随机分为两组进行膀胱部分切除术。A组用单纯BAMG修复膀胱缺损,B组用复合自体BMSCs的BAMG修复膀胱缺损。分别在术后1、2、4、8、12周取材进行组织学和免疫组织化学检测评价膀胱组织再生情况。结果 所有动物术后均存活。组织学检测结果表明B组术后2周时已有尿路上皮形成,术后8周和12周时在修复区再生出与正常膀胱组织相似的膀胱壁结构。A组术后4周观察到尿路上皮再生,术后12周时仍然缺乏良好的平滑肌组织再生。结论 自体BMSCs复合BAMG比单纯BAMG更能促进膀胱缺损区修复和组织再生。自体BMSCs是组织工程膀胱可供选择的种子细胞来源。
摘要:
目的 通过观察不同浓度外源性一氧化氮(nitric oxide ,NO)供体硝普钠(SNP)对脂肪干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)增殖状况及相关基因表达的影响,探讨外源性NO在ADSCs成软骨分化中的作用。方法 获取并培养ADSCs,分别进行成骨和成脂诱导,采用茜素红染色和油红O染色进行多向分化鉴定。NO检测试剂盒检测ADSCs成软骨分化过程中NO的变化;采用细胞计数试剂盒-8(CCK8)法检测不同浓度SNP(0.25 mmol/L、1.00 mmol/L、4.00 mmol/L)下ADSCs的增殖情况。以Real time-PCR(RT-PCR)方法检测ADSCs在不同浓度SNP下,表达转化生长因子-β1(TGF-β1)以及成软骨分化特异基因——信号传导蛋白Smad3、 Ⅱ胶原蛋白(Col-Ⅱα1)基因的变化。结果 培养的细胞经成骨和成脂诱导后茜素红染色和油红O染色呈阳性;ADSCs成软骨分化过程中,培养上清液中NO浓度始终比对照组高(P<0.05);与对照组相比,低浓度SNP(0.25 mmol/L、1.00 mmol/L)对ADSCs的增殖无明显影响(P>0.05),高浓度SNP(4.00 mmol/L)抑制ADSCs增殖,差异有统计学意义(P<0.05)。RT-PCR检测发现SNP能抑制ADSCs自身TGF-β1 mRNA的表达,同时抑制Smad3 mRNA和Col-Ⅱα1 mRNA的表达。结论 在ADSCs成软骨分化过程中,外源性NO可以通过抑制ADSCs自身产生TGF-β1,并且抑制TGF-β下游信号通路,从而抑制成软骨分化。
摘要:
目的 通过对连续动物传代和试管培养的赖型钩端螺旋体部分致病基因表达差异性的检测,分析赖型钩端螺旋体特异性基因表达与毒力改变之间的联系,了解赖型钩端螺旋体致病过程和发病机制。方法 将27只豚鼠分为3组(n=9),分别经腹部皮下接种1 mL体内培养钩体(体内培养组)、体外培养钩体(体外培养组)或钩体培养基(培养基组),接种钩体浓度为108/mL并处于对数生长期。在接种后15 d内观察其发病和死亡状况,测量其体温体质量变化情况,并于接种后第15 d将存活豚鼠处死,测量脏器系数,了解经不同环境培养的钩体的毒力情况;以赖型钩端螺旋体标准株DNA为模板,采用PCR技术扩增出所选特定基因作为探针,使用点样仪进行芯片点样。分别提取经豚鼠体内连续数代培养的钩端螺旋体RNA与EMJH培养基中培养的钩端螺旋体RNA,逆转录后分别使用Cy5和Cy3进行荧光标记,并与基因芯片进行杂交。扫描后通过分析两种荧光强度的比值,了解赖型钩端螺旋体相关毒力基因的差异表达情况。结果 接种后,体内培养组豚鼠存活率为0%,体外培养组豚鼠存活率为88.9%,培养基组豚鼠全部存活;体内培养组豚鼠较其余两组豚鼠体温升高(P<0.05)、体质量下降(P<0.05);体内培养组豚鼠心、肺、肾的脏器系数较体外培养组及培养基组豚鼠更大(P<0.05);解剖后,体内培养组豚鼠肺部出血情况较其余两组更为严重;通过基因芯片,检测到溶血素基因以及其他与钩体生存致病能力相关的基因呈现出不同程度的改变,溶血素基因LA1027、LA1029、LA4004、LA3050、LA3540、LA0327、LA0378、LA1650、LA3937、O抗原连接酶基因LA2089、鞭毛动力蛋白基因LA3576、外膜蛋白基因LA0011及Loa22基因上调。结论 赖型钩体经连续体内培养后毒力增高,钩体毒力变化与其基因表达差异存在联系,了解这些基因的变化意义对阐明钩体的致病机制有重要意义。
摘要:
目的 了解凋亡相关斑点样蛋白(PYCARD)基因及其转录剪接体-1、-2(PYCARD-1、-2)在原发性痛风(PG)患者外周血单个核细胞(PBMCs)中的表达水平及作用。方法 采用半定量聚合酶链反应(RT-PCR)法检测95例PG患者〔原发性痛风急性期(APPG)44例、原发性痛风非急性期(NAPPG)51例〕和87例健康对照PBMCs中PYCARD基因及其PYCARD-1、-2 mRNA表达水平;Western blot法检测PG患者和健康对照PBMCs的PYCARD、核因子-κB(p105/p50)〔NF-κB(p105/p50)〕蛋白表达水平;检测APPG、NAPPG患者与健康对照血尿酸及部分血常规指标,并分析PYCARD基因及其PYCARD-1、-2 mRNA表达与各指标的相关性。结果 APPG与NAPPG患者PYCARD基因及其PYCARD-1、-2 mRNA相对表达量均高于健康对照组(P<0.01),NAPPG患者PBMCs中PYCARD、2x mRNA和2y mRNA的相对表达量高于健康对照和APPG患者组(P<0.05);PG患者PYCARD、NF-κB(p105/p50)蛋白表达均高于健康对照组〔分别为(4.900±1.324) vs. (3.975±0.210)和(0.263±0.106) vs. (0.127±0.008),P均<0.05〕;相关性分析显示NAPPG组PYCARD-2 mRNA表达与嗜中性粒细胞绝对值呈正相关(r=0.3785,P<0.01)。结论 PG患者PBMCs中PYCARD基因及其转录剪接体mRNA表达以及PYCARD蛋白表达均异常,提示在PG患者的炎症反应中PYCARD基因及其转录剪接体可能发挥重要的调控作用。
摘要:
目的 建立挤压综合征急性肾损伤(AKI)小鼠模型,探究肌红蛋白诱导的肾小管上皮细胞内质网应激及细胞凋亡在挤压综合征中的致病机制。方法 体内实验:将C56BL/6小鼠随机分为对照组、模型组8 h及模型组24 h,每组6只,模型组于小鼠大腿外侧肌注50%甘油生理盐水溶液(8 μL/g)建立挤压综合征模型,对照组注入等量生理盐水。分别于注射后8、24 h麻醉处死动物,检测血清肌酐(sCr),获取完整肾脏标本进行电镜及TUNEL染色观察凋亡,采用免疫组化、实时荧光定量PCR等检测凋亡及内质网应激相关蛋白表达。体外实验:将人近端肾小管上皮细胞随机分为对照组、干预组6 h及干预组12 h,对照组加入标准细胞培养液,干预组加入等量含马肌红蛋白的细胞培养液,分别于6、12 h后收取细胞进行流式分析检测细胞凋亡。结果 注射甘油8 h后sCr明显升高,挤压综合征模型建立成功。电镜示与对照组相比,模型组肾小管上皮细胞内质网、线粒体等细胞器肿胀较明显。TUNEL染色提示模型组肾组织凋亡细胞百分比高于对照(P<0.05)。免疫组化染色和实时荧光定量PCR示模型组肾组织凋亡标志蛋白半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)3及内质网应激标志蛋白CCAAT增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)、caspase12表达高于对照组(P<0.05)。细胞流式分析提示马肌红蛋白干预组细胞凋亡比例较对照组升高(P<0.05)。结论 内质网应激及凋亡参与了挤压综合征导致AKI的发病机制,肌红蛋白可能是诱导细胞凋亡的重要因素。
摘要:
目的 研究不同浓度的葡萄糖对表皮葡萄球菌野生株、saeRS基因删除突变株及回复株生存能力的影响及机制。方法 在BM培养基中添加不同浓度(7.0 mmol/L、14 mmol/L、28 mmol/L、56 mmol/L)的葡萄糖,分析3种表皮葡萄球菌的生存能力、生物膜形成能力、培养基的酸度及抵抗抗生素生存的能力。结果 与表皮葡萄球菌野生株相比,葡萄糖能明显促进saeRS删除突变株的生存能力和生物膜形成能力,但能够明显降低其对抗生素(比如青霉素、苯唑西林、庆大霉素、环丙沙星和丁胺卡那霉素)的抵抗能力;saeRS删除突变株和回复株在14 mmol/L浓度时生存能力最强,在28 mmol/L浓度时生物膜形成能力最强,而葡萄糖浓度对于野生株的生存能力及生物膜形成能力无显著影响。在添加14 mmol/L葡萄糖时,saeRS删除突变株培养基(pH=8.07)的酸度比野生株(pH=7.0)明显降低。结论 saeRS可能通过介导葡萄糖的利用影响了表皮葡萄球菌的生存能力;双组分信号转导系统saeRS影响抗生素如青霉素、苯唑西林、庆大霉素、环丙沙星和丁胺卡那霉素对表皮葡萄球菌的杀菌作用。
摘要:
目的 观察电刺激孤束核(nucleus tractus solitarius,NTS)对心包内注射辣椒素诱发的心脏-躯体运动反射(cardiac-somatic motor reflex,CMR)的影响,以及脊髓鞘内注射受体拮抗剂对NTS这一电刺激效应的影响,探讨参与NTS对心脏伤害性信息调控的脊髓机制。方法 SD大鼠随机分为电刺激组、对照组、育亨宾组、纳洛酮组。分别单独电刺激NTS或电刺激NTS结合脊髓鞘内注射溶媒、生理盐水、去甲肾上腺素α2受体阻断剂(育亨宾)或阿片受体阻断剂(纳洛酮),观察以背斜方肌肌电(electromyogram, EMG)活动为指标的CMR变化。结果 与对照比较,电刺激(10、20、50 μA) NTS,CMR呈强度依赖性的减少(P<0.05);鞘内注射育亨宾的溶媒或生理盐水10 μL,对20 μA电刺激的抑制效应没有明显影响(P>0.05); 鞘内注射育亨宾(20、50 μg)或纳洛酮(50、100μg),电刺激对CMR的抑制效应被翻转 (P<0.05);鞘内注射小剂量的纳洛酮(10μg),使电刺激对CMR的抑制效应增强(P<0.05)。结论 电刺激NTS对心脏伤害性感受信息有下行抑制作用,脊髓的α2去甲肾上腺素受体和阿片受体介导NTS的下行抑制作用,小剂量的纳洛酮对该下行抑制有协同作用。
摘要:
目的 研究krüppel-like factor 5基因(KLF5)的表达对吉西他滨介导的肺腺癌细胞凋亡的影响及分子机制。 方法 在体外培养的肺腺癌细胞H441中,分别转染KLF5表达质粒和空载体对照质粒培养68 h后,加入100 nmol/L的凋亡诱导药物吉西他滨处理4 h,使用细胞计数和流式细胞术方法检测细胞增殖和凋亡; Western blot检测KLF5蛋白的表达,RT-PCR检测KLF5及凋亡相关基因CD95BAX的表达;免疫荧光染色比较凋亡相关蛋白Caspase 3的表达。 结果 Western blot结果证明KLF5转染成功。无吉西他滨诱导情况下,KLF5高表达对H441细胞的凋亡无显著影响,CD95BAX基因的表达差异无统计学意义;吉西他滨诱导情况下,与对照组相比,KLF5高表达的H441细胞中凋亡细胞比例增加(P<0.05),CD95BAX基因的表达上升(P<0.05),Caspase 3的表达上调。 结论 在吉西他滨诱导下,体外KLF5高表达促进肺腺癌细胞H441的凋亡。其机制可能是通过抑制细胞增殖和修复激活Caspase 3、CD95和BAX等细胞凋亡通路相关蛋白实现。
摘要:
目的 探讨藁本内酯(ligustilide, LIG)对原代培养小脑颗粒神经元细胞(cerebellar granule neurons, CGN)低钾性凋亡的影响。方法 建立低钾诱导体外培养新生大鼠CGN凋亡模型,将CGN分为对照组、模型组、CGP54626+LIG组及LIG组,分别进行给药处理;采用噻唑兰 (MTT) 法检测各组细胞存活率,Western blot检测胰岛素样生长因子1(IGF-1)信号通路中主要效应分子IGF-1R、Akt、ERK1/2、CREB及caspase 3的蛋白表达水平。 结果 LIG(2.5~20 μmol/L) 可浓度依赖性抑制大鼠 CGN的低钾性凋亡、提高其存活率; 20 μmol/L LIG 可显著上调IGF-1R、Akt、ERK1/2 和CREB 的磷酸化水平,下调 cleaved-caspase 3 的表达水平;同时,LIG上述效应均可被γ-氨基丁酸代谢型受体(GABAB)的选择性拮抗剂 CGP54626 所阻断。结论 LIG 对低钾所致大鼠CGN凋亡有保护作用,其机制可能与激活GABAB受体及其下游的 IGF-1 信号通路有关。
摘要:
目的 观察食源性肥胖大鼠下丘脑结节性硬化症基因1(tuberous sclerosis complex 1,Tsc1)启动子区甲基化率及哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)的表达。方法 16只雄性SD大鼠分为高脂喂养组和基础饲料喂养组(对照组),每组8只,共喂养12周。测定两组大鼠体质量、腹腔脂肪量、腹腔脂肪/体质量比值,采用重亚硫酸盐的测序法检测Tsc1启动子甲基化,RT-PCR、Western blot分别检测mTOR mRNA和蛋白表达。结果 高脂组大鼠体质量、腹腔脂肪量、腹腔脂肪/体质量比均高于对照组(P<0.05)。两组大鼠下丘脑Tsc1启动子区均有11个位点可被甲基化,食源性肥胖组甲基化率(94.50%±4.66%)高于对照组(86.60%±3.49%,P<0.002),mTOR mRNA和蛋白表达均高于对照组(P<0.05)。结论 食源性肥胖大鼠下丘脑Tsc1基因启动子甲基化率增加,其下游基因mTOR表达上调,可能参与了肥胖的发生。
摘要:
目的 探讨参芎化瘀胶囊预处理对全脑缺血大鼠海马CA1区重组蛋白A(small GTP binding protein A, RHOA)和RHO激酶2(RHO associated protein kinase-2, ROCK-Ⅱ)表达的影响。方法 96只SD雄性大鼠分3组,每组32只,造模前7 d开始灌胃,至处死日早晨结束。正常对照组(生理盐水灌胃)、全脑缺血模型组(生理盐水灌胃)和参芎化瘀胶囊+全脑缺血组(参芎化瘀胶囊0.048 g/kg体质量,溶于0.5 mL双蒸水中,每日1次,灌胃0.3 mL/100 g体质量)。后两组采用改良的Pulsinelli四血管闭塞法制作大鼠全脑缺血模型,分别在造模成功后1、3、7、14 d四个时间点采用水迷宫行为学检测评价学习记忆能力,处死大鼠后取脑组织HE 染色观察组织病理学的变化,免疫组化法观察RHOA 和ROCK-Ⅱ 表达,蛋白印迹分析检测RHOA 和ROCK-Ⅱ 蛋白含量。结果 和正常对照组比较,模型组大鼠各个时间点逃避潜伏期时间延长(P<0.05),参芎化瘀胶囊治疗后大鼠逃避潜伏期时间缩短(P<0.05),但仍长于正常对照组(P<0.05)。HE染色显示,与正常组比较,模型组大鼠海马CA1 区神经元1~14 d存活神经元逐渐减少;参芎化瘀胶囊治疗后各个时间点存活神经元增加(P<0.05),但仍少于正常组(P<0.05);免疫组化和蛋白印迹分析显示,正常对照组RHOA 和ROCK-Ⅱ表达不明显,模型组先升高后下降。参芎化瘀胶囊组所有时间RHOA 和ROCK-Ⅱ 表达均较模型组降低(P<0.05),但仍高于正常组(P<0.05)。结论 参芎化瘀胶囊改善全脑缺血引起的神经元损伤,降低海马CA1 区RHOA 和ROCK-Ⅱ 的表达。
摘要:
目的 分析糖尿病肾脏疾病与非糖尿病肾脏疾病患者动脉硬化程度的差异及其影响因素。方法 纳入44例糖尿病肾脏疾病患者(DKD组)和31例非糖尿病肾脏疾病患者(NDKD组),均合并高血压。通过24 h动态血压监测血压数值从而得到短时血压变异性及动态动脉硬化指数(AASI)值。协方差分析比较两组患者短时血压变异性及AASI值的差异,相关分析初步了解与糖尿病肾脏疾病患者AASI相关的各种因素,进一步进行多重线性回归分析得到影响糖尿病肾脏疾病患者AASI的主要因素。结果 协方差分析(排除年龄的影响)显示DKD组患者24 h收缩压变异性(24 hSBPV)、白昼收缩压变异性均大于NDKD组(P<0.05),同时,将DKD组患者AASI(0.55±0.14)与NDKD组患者AASI(0.45±0.16)相比较,其差异存在统计学意义(P<0.05),DKD组患者动脉硬化程度更严重。相关分析显示糖尿病肾脏疾病患者AASI与24 hSBPV、24 h舒张压变异性(24 hDBPV)、白昼舒张压变异性(dDBPV)、夜间收缩压变异性(nSBPV)、夜间舒张压变异性(nDBPV)相关,多重线性回归分析结果提示AASI主要受到nDBPV和年龄的影响。结论 糖尿病肾脏疾病及非糖尿病肾脏疾病患者均存在一定程度的动脉硬化,而前者AASI升高更显著,同时,糖尿病肾脏疾病患者短时血压变异性较非糖尿病肾脏疾病患者更大。DKD患者AASI受到年龄、nDBPV的显著影响。
摘要:
目的 探讨不同浓度17β-雌二醇(17β-E2)对二氧化硅(SiO2)刺激的小鼠肺成纤维细胞表达Caveolin-1和Ⅲ型胶原的影响。方法 将体外培养的小鼠肺成纤维细胞分5组:空白对照组,SiO2(100 mg/L)组,SiO2(100 mg/L)+不同剂量17β-E2组(10-8、10-7、10-6 mol/L),17β-E2作用48 h后收集各组细胞,应用免疫组化法检测Caveolin-1和Ⅲ型胶原表达。结果 SiO2 处理组小鼠肺成纤维细胞与空白对照组比较Caveolin-1表达降低(P<0.05),而SiO2+ 17β-E2处理组随着17β-E2剂量增大Caveolin-1表达明显升高(P<0.05);各处理组Ⅲ型胶原表达差异有统计学意义(P<0.05),SiO2组与空白对照组比较增高(P<0.05),而17β-E2处理组均低于SiO2组(P<0.05);相关分析显示,17β-E2与Caveolin-1的表达呈正相关(r=0.926,P<0.05),与Ⅲ型胶原表达呈负相关(r=-0.914,P<0.05),Caveolin-1与Ⅲ型胶原表达亦呈负相关(r=-0.887,P<0.05)。结论 17β-E2可能通过上调肺成纤维细胞Caveolin-1 的表达,抑制Ⅲ型胶原表达而发挥抗纤维作用。
摘要:
目的 探讨载脂蛋白CⅢ基因(APOC3)SstⅠ和-482C>T多态性与不同体质量指数(BMI)健康青少年血脂水平的相关性。方法 根据BMI将723例青少年按四分位数分为4组,从低到高依次为1组〔BMI=(17.80±0.75) kg/m 2n=180〕、2组〔BMI=(19.39±0.32) kg/m2n=182〕、3组〔BMI=(20.68±0.43) kg/m2n=181〕和4组〔BMI=(23.40±2.05) kg/m2n=180〕。抽取空腹静脉血5 mL,测定血脂,提取基因组DNA并采用PCR-RFLP法对APOC3 SstⅠ和-482C>T多态性位点进行分型。结果 随着BMI增加,身高和高密度脂蛋白胆固醇降低(P<0.001);体质量、腰围、臀围、腰臀比、甘油三酯(TG)、总胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇升高(P<0.001)。SstⅠ多态性不同基因型青少年的血脂水平在1组、2组和3组中差异无统计学意义;在第4组中,血浆TG水平在不同基因型之间差异有统计学意义(P=0.022),S2等位基因携带者的TG水平高于S1S1基因型青少年。-482C>T多态性不同基因型青少年的血脂水平在各组中差异无统计学意义。结论 在健康青少年中,APOC3 SstⅠ多态性S2等位基因对血浆TG的升高作用与BMI有关,降低体质量或可改善S2等位基因对血浆TG的增高作用。
摘要:
目的 了解口服免疫球蛋白对儿童轮状病毒肠炎的临床疗效,探究其对患儿肠道自身分泌型IgA(SIgA)生成的影响。方法 纳入本院确诊的轮状病毒肠炎患儿100例,采用随机对照试验方法分为两组(对照组和口服免疫球蛋白组),每组50例患儿。在口服蒙脱石散和补液等基本治疗的基础之上,对照组予安慰剂口服,免疫球蛋白组予“抗轮状病毒鸡卵黄IgY”口服治疗。于治疗第1、3、5、7、9、11 d收集患儿大便,定期记录临床症状。采用放射免疫法定量检测大便SIgA水平,双抗体夹心酶联免疫法半定量检测大便轮状病毒排泄量。 结果 治疗1 d后,口服免疫球蛋白组患儿腹泻频次较对照组明显减轻(P<0.05)。口服免疫球蛋白组病程为(4.5±0.92) d,对照组为(5.8±1.68) d,两组差异有统计学意义(P=0.015)。口服免疫球蛋白组患儿大便中SIgA含量在各时间点均高于对照组(P<0.05),口服免疫球蛋白组大便SIgA含量倍增时间在第3 d,对照组在第5 d。口服免疫球蛋白组的大便轮状病毒排泄量在各时间点均低于对照组(P<0.05)。 结论 口服免疫球蛋白能促进机体自身SIgA生成,有益于肠道内轮状病毒的清除,从而快速缓解轮状病毒肠炎临床症状,缩短病程。
摘要:
目的 了解2012年中国西南地区Whire Union监测网中血流感染患者病原菌的分布及耐药状况,为血流感染的预防和控制提供依据。方法 使用WHONET5.5和SPSS19.0软件对西南地区3所三级甲等教学医院2012年分离的血培养菌株进行回顾性分析。结果 共分离出病原菌1 745株,包括革兰阴性菌868株(49.74%)和革兰阳性菌877株(50.26%)。革兰阳性菌中常见菌为凝固酶阴性葡萄球菌(61.69%)、肠球菌属(16.31%)和金黄色葡萄球菌(14.60%)。革兰阴性菌中常见菌依次为大肠埃希菌 (43.66%)、克雷伯菌属 (19.59%)、不动杆菌属(9.45%)和沙门菌属(6.68%)。血流感染中,耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)和耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌(MRCNS)的检出率分别为37.5%和85.4%。屎肠球菌对万古霉素的耐药率为6.3%,暂未发现对万古霉素耐药的粪肠球菌;粪肠球菌和屎肠球菌对利奈唑胺的耐药率分别为1.4%和7.9%;屎肠球菌对多数常用抗菌药物的耐药率显著高于粪肠球菌。大肠埃希菌、克雷伯属和肠杆菌属细菌对亚胺培南的耐药率分别为0.7%、3.6%和11.1%。不发酵糖革兰阴性杆菌对碳青霉烯类抗生素耐药率较高,铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌对亚胺培南的耐药率分别为25.0%和79.1%。血流感染发生前使用过抗菌药物或住重症监护病房(ICU)患者更易感染MRSA与多重耐药鲍曼不动杆菌。进行气管切开/插管的患者更易感染多重耐药鲍曼不动杆菌。 结论 我国西南地区血流感染的常见病原菌为凝固酶阴性葡萄球菌、大肠埃希菌、克雷伯菌、肠球菌和金黄色葡萄球菌。血培养分离株对常用抗菌药耐药情况复杂,其中MRSA检出率低于全国监测水平,对万古霉素耐药的肠球菌分离率较高。革兰阴性杆菌中肠杆菌科细菌对亚胺培南耐药率存在属间差异,而非发酵菌特别是不动杆菌的耐药形势严峻。抗菌药物的使用或有创性诊疗操作可导致耐药菌感染的发生,故合理应用抗菌药物,加强医院感染控制应成为减少细菌耐药发生的重要策略。
摘要:
目的 了解四川地区隐球菌临床分离株基因分型及体外临床常用抗真菌药物敏感性情况。方法 采用针对URA5基因PCR产物的限制性片段长度多态性(RFLP)方法对收集自我校华西医院的92株隐球菌临床分离株进行基因分型;采用E-test法检测临床常用抗真菌药物两性霉素B(AMB)、氟胞嘧啶(FC)、氟康唑(FCA)、伊曲康唑(ITR)和伏立康唑(VRC)对隐球菌分离株的最低抑菌浓度(MIC)范围,并计算其MIC50、MIC sub>90。结果 92株隐球菌中,91株为新生隐球菌VNⅠ型,1株为格特隐球菌VGⅡ型。5种抗真菌药物对92株隐球菌临床株的MIC值范围、MIC 50、MIC90值分别如下:两性霉素B为<0.002~2 μg/mL、0.19 μg/mL和0.75 μg/mL;氟胞嘧啶为0.5~>32 μg/mL 、4 μg/mL和8 μg/mL;氟康唑为0.5~32 μg/mL、 3 μg/mL和8 μg/mL;伊曲康唑为0.064~2 μg/mL、 0.5 μg/mL和1.5 μg/mL;伏立康唑为0.004~0.19 μg/mL 、0.047 μg/mL和0.094 μg/mL。其中3株(3.3%)对两性霉素B耐药,4株(4.3%)对氟胞嘧啶耐药,25株(27.2%)对伊曲康唑耐药,未发现对氟康唑耐药的菌株,所有菌株对伏立康唑敏感。格特隐球菌(1株)对氟胞嘧啶耐药,对氟康唑剂量依赖敏感。不同时间段隐球菌对5种抗真菌药物的MIC值比较,差异均具有统计学意义。随时间推移,两性霉素B及氟胞嘧啶的MIC值有所升高,唑类药物MIC值变化无规律。结论 四川地区隐球菌以新生隐球菌VNⅠ型为主,存在格特隐球菌VGⅡ型。除伊曲康唑外,隐球菌对其他抗真菌药物敏感性高,仅少数菌株对两性霉素B及氟胞嘧啶耐药。
摘要:
目的 分析口腔常见条件致龋菌变异链球菌在不同材料活动义齿牙冠上的黏附情况,为临床选择活动义齿牙冠材料以尽可能减少变异链球菌在义齿牙冠上黏附,从而避免佩戴义齿后对口腔环境的二次影响提供参考。方法 3种材料(单层色合成树脂牙、多层色合成树脂、合金钉瓷牙)活动义齿牙冠在无菌处理过的人唾液样本环境下进行24 h黏附,取出牙冠后超声强震荡并10倍梯度稀释后涂板计数,分析3种材料牙冠细菌的黏附量。结果 3种材料的活动义齿牙冠表面均有变异链球菌的黏附,其中单层色合成树脂牙黏附最多,其次为合金钉瓷牙,而多层色合成树脂牙黏附细菌量远远低于另外两种(P<0.01)。结论 3种材料的活动义齿,以多层色合成树脂牙表面黏附的变异链球菌数量最少,变异链球菌在该材料上的黏附能力显著低于单层色合成树脂牙和合金钉瓷牙。
摘要:
目的 分析DSSI-23量表用于农村老年人社会支持研究的信度和效度。方法 采用分层整群随机抽样法,抽取广元市702例60岁及以上、无严重听力障碍及精神问题的农村老年人作为调查对象,采用内部一致性信度、折半信度、内容效度、集合效度、区分效度和结构效度对DSSI-23量表的信度效度进行分析。结果 DSSI-23量表总的内部一致性信度为0.881;折半信度为0.918;各条目得分(除条目3)与总分的相关系数(r)均大于0.35(P<0.01);集合效度与区分效度定标实验成功率均为100%;对量表的理论模型进行验证性因子分析发现,χ2/df=6.884,比较拟合指数(CFI)=0.807,拟合优度指数(GFI)=0.850,估计误差均方根(RMSEA)=0.092。结论 DSSI-23量表用于农村老年人社会支持研究的信度较好,但其结构效度较差,个别条目需进行适当的调整。
摘要:
目的 探讨健康调查问卷SF-12及EQ-5D量表评价脑卒中患者生命质量时的差异。方法 通过面对面访谈的方式,用EQ-5D和SF-12量表测评缺血性脑卒中幸存者生命质量。分析EQ-5D不同维度3个水平SF-12生理得分(PCS-12)、心理得分(MCS-12)的差异,SF-12组间EQ-5D指数分数的差异,并分析EQ-5D指数分数、视觉模拟评分VAS分数分别与PCS-12、MCS-12的相关性。结果 PCS-12评分在EQ-5D每个维度的3个水平间均不相同(P<0.0001);除疼痛不舒服维度外,MCS-12在其余各个维度3个水平间均不相同(P<0.05)。EQ-5D指数分数、VAS分数分别在不同PCS-12分数段不同(P<0.05);EQ-5D量表评分健康没问题的人群在不同SF-12分数段比较,未发现不同(P>0.05); EQ-5D指数和VAS分数与PCS-12分数的相关系数分别为0.33(P<0.001)、0.15(P<0.001),EQ-5D指数和VAS分数与MCS-12分数的相关系数分别为0.13(P<0.001)、0.17(P<0.001)。结论 EQ-5D和SF-12量表评价脑卒中患者的生命质量时具有弱相关性,SF-12可通过精细的分类评价患者生命质量,而若同时进行生命质量卫生经济学评价,则EQ-5D更为合适。
子痫前期发病机制研究
摘要:
子痫前期是一种产科严重并发症,不仅影响孕产妇健康,还可影响后代远期预后,其发病机制至今不清,因此,对子痫前期发病机制的研究一直是产科领域的热点。目前子痫前期发病机制学说众多,但各有长短,本专题主要从可能与子痫前期发病有关的遗传、表观遗传及部分基因等的表达变化等方面探讨了子痫前期的发病机理。希望通过对众多观点的总结,整合相关资源,更新研究理念和丰富研究手段来取得子痫前期发病机理研究的新的突破。
摘要:
目的 观察子痫前期患者胎盘组织母源性印迹基因PHLDA2印迹状态。方法 收集21例正常妊娠和19例子痫前期患者胎盘组织,抽提样本DNA,PCR扩增,选择PHLDA2基因组变异比例较高的单核苷酸多态性(SNP)位点:rs13390为外显子1中C/T多态性(PHLDA2-1),rs1056819为外显子2中G/A多态性(PHLDA2-2),直接测序筛选杂合子。将杂合子样本的RNA逆转录合成cDNA,PCR扩增直接测序判断PHLDA2基因印迹状态。结果 正常妊娠与子痫前期胎盘PHLDA2-1(外显子1)SNP位点(C/T)均未发现杂合子,全为T/T纯合子;胎盘PHLDA2-2(外显子2)SNP位点(G/A)在子痫前期有4例(4/19)、正常妊娠有5例(5/21)杂合子表达,两组杂合子表达差异无统计学意义(P>0.05)。PHLDA2-2杂合子胎盘组织PHLDA2cDNA均只表达G单等位基因。结论 子痫前期胎盘PHLDA2(PHLDA2-1及PHLDA2-2)基因多态性与正常妊娠相似,未发现PHLDA2 基因印迹丢失现象。
摘要:
目的 研究血小板活化因子乙酰水解酶基因(PAF-AH)Ala379Val位点多态性是否与子痫前期(PE)发病有关。方法 应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术对成都地区210例PE患者和382例正常孕妇的PAF-AH基因Ala379Val位点多态性进行分析;以血小板活化因子(PAF)为底物, 3 H-PAF为示踪剂,采用三氯乙酸沉淀法测定血浆PAF-AH、高密度脂蛋白(HDL)结合PAF-AH(H-PAF-AH)和低密度脂蛋白(LDL)结合PAF-AH(L-PAF-AH)活性。 结果 PAF-AH基因Ala379Val位点AA、AV、VV基因型和A、V等位基因频率在PE患者和正常孕妇组之间差异无统计学意义(P>0.05)。然而,与携带AA基因型的PE患者比较,携带V等位基因的PE患者有更高的体质量指数(BMI)、L-PAF-AH/H-PAF-AH活性比值(P<0.05),更低的H-PAF-AH活性(P<0.05)。结论 未发现PAF-AH基因Ala379Val位点多态性与成都地区PE发病存在关联性,但该位点V等位基因变异可能与PE孕妇BMI增加、血浆PAF-AH活性在脂蛋白中的分布异常有关。
摘要:
目的 观察长链非编码RNA(lncRNA)HOX转义反录RNA(HOTAIR)在子痫前期(PE)胎盘组织中的表达及其对滋养细胞HTR-8/SVneo增殖、侵袭及凋亡能力的影响。方法 采用实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测23例重度PE和23例正常产妇胎盘组织中HOTAIR mRNA表达水平。分别构建其封闭(si-HOTAIR)及过表达载体(pcDNA-HOTAIR),与其对照(si-NC及空载体)分别转染HTR-8/SVneo细胞24~48 h后, qRT-PCR检测细胞中HOTAIR mRNA表达水平验证干扰效率和过表达倍数。采用克隆形成实验和MTT法检测转染后细胞生长增殖能力,Transwell法检测转染后细胞迁移、侵袭能力改变。应用流式细胞技术检测转染后细胞凋亡改变, Western blot检测凋亡相关蛋白表达情况。结果 PE胎盘组织中HOTAIR水平高于正常组织(P<0.05); pcDNA-HOTAIR组细胞HOTAIRmRNA过表达倍数为51.27; si-HOTAIRHOTAIRmRNA表达被抑制超过95%,证明过表达和封闭均有效;pcDNA-HOTAIR组细胞增殖能力降低, si-HOTAIR组细胞增殖增加(P<0.05);pcDNA-HOTAIR组细胞的穿膜细胞数低于对照组,si-HOTAIR组细胞穿膜数高于对照组(P<0.05);pcDNA-HOTAIR组细胞凋亡增加,si-HOTAIR组凋亡被抑制(P<0.05);pcDNA-HOTAIR组促凋亡蛋白Caspase-3表达增加,而si-HOTAIR组降低;抑凋亡蛋白 BCL-2与之相反(P<0.05)。结论 HOTAIR可能通过抑制滋养细胞的增殖和侵袭能力,加速滋养细胞凋亡,从而参与PE的发生发展。
摘要:
目的 探讨G蛋白β3亚单位(GNB3)和血管紧张素Ⅰ转换酶(ACE)基因相互作用是否与子痫前期的发生有关联。方法 采用ACE基因PCR扩增片段长度多态性及GNB3基因限制性片段长度多态性方法,对成都地区汉族188例子痫前期及273例正常孕妇进行对照检测。结果 子痫前期及正常孕妇GNB3C825T和ACE I/D位点基因型和等位基因频率在两组之间差异无统计学意义(P>0.05),未见GNB3 C825T等位基因及ACEI/D相互作用与子痫前期发生的危险增加有关(OR 0.439~1.203,P均>0.05)。对联合基因型与血压水平关系的分析发现,正常对照组TT/II基因型携带者其舒张压水平增高〔(77.61±1.26) mmHg(1 mmHg=0.133 kPa)〕,且高于TT/ID〔(70.94±1.64) mmHg〕、CT/ID〔(73.15±0.89) mmHg〕和CT/DD〔(72.57±2.14) mmHg〕基因型携带者(P均P>0.05)。结论 本研究未发现GNB3基因C825T及ACE基因I/D位点的相互作用与中国人(成都地区)子痫前期发病有关联,但发现两基因的相互作用与正常孕妇舒张压水平有关。
摘要:
目的 探讨p57 kip2基因的核酸及蛋白水平在正常孕妇和子痫前期患者胎盘上的表达,探索p57 kip2基因与子痫前期发病之间的关系。方法 运用免疫组织化学SP法对p57 kip2基因在胎盘组织中的表达进行定位检测;通过逆转录聚合酶链反应法(RT-PCR)对37例重度子痫前期、22例轻度子痫前期及53例正常妊娠胎盘组织中的p57 kip2基因的核酸水平进行检测;通过免疫印迹法对纳入对象的p57 kip2蛋白表达水平进行检测。结果 免疫组化结果显示p57 kip2基因选择性表达于胎盘滋养细胞的细胞核中。RT-PCR结果显示:与正常妊娠组比较,轻、重度子痫前期组p57 kip2基因mRNA表达无明显变化(P>0.05),重度子痫前期组p57 kip2基因的mRNA表达水平低于轻度子痫前期组〔P<0.05,95%CI:(-0.736 9,-0.095 8)〕。免疫印迹结果显示:与正常妊娠组比较,轻、重度子痫前期组p57 kip2蛋白表达无明显变化(P>0.05),但重度子痫前期组p57 kip2蛋白的表达水平低于轻度子痫前期组〔P<0.05,95%CI:(-1.441 7,-0.162 4)〕。结论 p57 kip2基因的核酸和蛋白在重度子痫前期患者胎盘中的表达水平均低于轻度子痫前期患者,提示p57 kip2基因可能参与子痫前期的病理过程。
技术与方法
摘要:
目的 探讨logistic回归中不同Pearson残差估计方法的差异,为回归诊断时残差估计方法及软件的选择提供参考。方法 通过对代表不同数据类型的两个实例构建logistic回归模型,并使用分别代表不同估计方法的SPSS与STATA软件计算其Pearson残差值,分析比较二者的异同。结果 Logistic回归模型的两种Pearson残差估计方法对协变量组数等于或近似等于研究对象个体数的数据的计算结果一致,而对协变量组数远小于研究对象个体数的数据的计算结果差异较大。结论 Logistic回归的两种Pearson残差估计方法在理论和应用上均有一定差异,针对协变量组数远小于研究对象个体数的数据,如何选择适当的Pearson残差估计方法,值得进一步深入研究。
摘要:
目的 建立系统性高表达含198位点多态性的胞质型谷胱甘肽过氧化物酶(cellular glutathione peroxidase-1,GPx-1)转基因小鼠(GPx-1 P198L),为研究GPx-1 P198L在氧化应激相关疾病中的作用提供动物模型。方法 利用显微注射法将限制性内切酶BamHⅠ和AccⅠ线性化的GPx-1(198Leu)转基因载体注射到C57BL/6J小鼠受精卵中,建立GPx-1 P198L转基因小鼠。PCR鉴定实验后小鼠的基因型,Western blot检测GPx-1蛋白表达。结果 建立了GPx-1 P198L首建鼠13只,筛选后9只原代转基因小鼠能产生子代,其中4只原代转基因小鼠产生的子代(F1代)心脏组织高表达GPx-1蛋白,4只小鼠成功建系。结论 建立了系统性表达突变型人GPx-1(198Leu)的转基因小鼠,为研究GPx-1(198Leu)在氧化应激相关疾病中的作用提供了动物模型。
研究报告
摘要:
目的 总结绒毛膜血管瘤(chorioangioma,CM)的产前超声图像特点,探讨其产前超声诊断价值,并进行预后评估。方法 收集30例经产前超声或病理诊断为CM的超声及病理资料。结果 产前超声诊断正确率73.33%(22/30);肿瘤最大径3.2~12.0 cm,平均6.61 cm,大于4.0 cm者占92.86%;超声多表现为单发于胎盘子面的弱回声,以AlderⅠ~Ⅱ级为主,肿瘤血管频谱与脐动脉频谱一致;肿瘤最大径大于4.0 cm及位于胎盘子面者易出现并发症,有并发症者肿瘤最大径大于无并发症者(P<0.05);71.43%不影响胎儿生长发育。结论 CM产前彩色多普勒超声图像具有特征性,肿瘤大小及位置在评估胎儿预后方面具有重要价值。
临床医学
摘要:
目的 考察注射用多尼培南在中国健康人体单次给药的临床药代动力学特性,为临床推荐优化的治疗方案。方法 12例健康志愿者按拉丁方三交叉试验设计,随机先后单剂量静脉滴注多尼培南0.25、0.5、1.0 g,采用高效液相色谱法分离紫外检测法(HPLC-UV)测定人血浆及尿中多尼培南浓度。用Phoenix? WinNonlin?6.1药代动力学程序计算得到非房室模型统计矩参数,并进行药代动力学特征分析。结果 单次静脉滴注多尼培南0.25、0.5、1.0 g后,血药峰浓度(Cmax)分别为(11.81±1.52)、(22.80±3.80)和(47.26±8.38) μg/mL;达峰时间(Tmax)分别为(60.42±1.44)、(58.33±5.77)和(60.00±0) min;半衰期(t1/2)分别为(63.48±10.51)、(69.12±16.72)和(69.30±11.71) min;药时曲线下面积(AUC0~t)分别为(1 100.86±150.04)、(2 111.50±359.58)和(4 359.50±789.38) μg/(mL·min)。直线回归分析和置信区间法分析均提示本品具有线性药代动力学特征。本品主要经肾脏排泄,给药后24 h尿液累积排泄率为70%~75%。本品安全性较好,不良反应发生率为19.44%,均为轻度。结论 注射用多尼培南具有线性动力学特征,男女患者应用本品无需调整给药剂量。
摘要:
目的 观察中药辨证治疗对慢性肾脏疾病(CKD)1~2期的慢性肾炎患者蛋白尿及临床疗效的影响。 方法 对11个医疗治疗中心的396例慢性肾炎患者采取前瞻性随机对照研究。396例患者分为治疗组297例,对照组99例。中医辨证为脾肾气阴两虚或脾肾气阳两虚,兼证为水湿、湿热、血瘀。治疗组予中药免煎颗粒每日一袋,对照组予氯沙坦50 mg/d。疗程24周。观察治疗前后(治疗后4、8、12、16、20、24周)24 h尿蛋白定量、肾小球滤过率估算值(eGFR)等肾功能及临床疗效(治疗后8、16、24周)的变化。 结果 最终361例患者纳入符合方案受试者分析(PPS)。治疗前两组患者24 h尿蛋白定量、eGFR差异无统计学意义。治疗后治疗组24 h尿蛋白定量呈现逐步下降趋势,治疗前后比较差异有统计学意义(P<0.001)。对照组治疗前后无明显变化。在治疗20周、24周后治疗组24 h尿蛋白量较对照组低,差异有统计学意义(P<0.05);所有患者的eGFR在治疗后均下降(P=0.001 4)。治疗组在3个随访时间点eGFR均略高于对照组,但组间差异均无统计学意义。治疗后24周治疗组和对照组临床缓解率、显效率、总有效率比较差异有统计学意义(P<0. 001)。结论 中药辨证治疗能显著下降慢性肾炎CKD1~2期的蛋白尿水平,提高总有效率,保护肾功能。
摘要:
目的 探讨单纯经闭孔无张力尿道中段悬吊术(TVT-O术)与TVT-O术结合电刺激生物反馈治疗女性压力性尿失禁(SUI)的疗效。方法 将 2012年1月至2013年 12月120例女性中至重度SUI 患者按随机分配表随机分为两组,A组60例单纯采用TVT-O术式,B组60 例采用电刺激生物反馈结合TVT-O术疗法(完成TVT-O手术后3个月,接受电刺激生物反馈疗法2个疗程),对所有患者于TVT-O术后1年门诊随访,观察临床症状改善的情况,主观疗效指标包括患者治疗前后72 h排尿日记(总排尿次数、总排尿量、总漏尿事件次数)尿失禁相关生活质量问卷(I-QOL)、国际尿失禁咨询委员会尿失禁问卷表简表评分(ICI-Q-SF)。疗效客观指标包括尿流动力学检查(最大尿流、残余尿量)、Valsalva漏尿点压(VLPP)和尿垫试验。结果 B组患者治愈率、显效率较A组升高(88.33% vs.75% 和16.67% vs. 10%,P均<0.05),而无效率较A组降低(1.67% vs. 8.33%,P<0.05)。B组患者治疗后在总排尿量、I-QOL、ICI-Q-SF、VLPP和尿垫试验方面均优于A组(P<0.05)。结论 TVT-O术结合电刺激生物反馈治疗中至重度女性压力性尿失禁有协同作用,疗效优于单纯TVT-O术。
摘要:
目的 研究头孢哌酮/舒巴坦(2∶1)治疗产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌感染的临床疗效,为临床合理用药提供初步依据。方法 回顾性分析四川大学华西医院2011年1月1日至2013年5月31日,从无菌体液及非痰、非尿液标本中培养出产ESBLs大肠埃希菌阳性,并用头孢哌酮/舒巴坦(2∶1)治疗的非重复感染病例,评价其临床治疗的有效性。结果 从非重复的2 017例产ESBLs大肠埃希菌感染病例中共筛选出21例合格病例,头孢哌酮/舒巴坦(2∶1)治疗的临床痊愈率仅为14.29%(3/21),有效率仅为66.67%(14/21),细菌清除率为71.42%(15/21),其中对产ESBLs大肠埃希菌引起的胆道感染、皮肤软组织感染、不伴实质器官感染的单纯性败血症的治疗效果相对深部脓肿、伴器官感染的败血症较好。结论 头孢哌酮/舒巴坦(2∶1)治疗产ESBLs大肠埃希菌感染的痊愈率低,有效率不高,价格昂贵,不推荐用于高龄、基础疾病重及复杂感染者。
摘要:
目的 分析卵巢硬化性间质瘤临床病理特点,探讨其诊断及鉴别诊断要点。方法 回顾性分析我院2004年6月至2013年8月13例卵巢硬化性间质瘤患者的临床资料,对肿瘤进行组织形态观察和免疫组织化学染色结果研究。结果 13例患者发病年龄为4~73岁,平均年龄30.72岁。临床表现为月经周期紊乱5例,其中1例伴有不孕,盆腹腔包块4例,绝经后阴道不规则流血3例,性早熟1例。本组病例肿瘤均为单侧发生,左侧5例,右侧8例,肿瘤合并子宫腺肌症2例、子宫平滑肌瘤3例、同时合并子宫平滑肌瘤和子宫内膜宫内膜样腺癌2例。8例患者行肿瘤标志物检测,糖类抗原19-9(CA19-9)及糖类抗原125(CA125)各有1例略高于正常值;5例患者行性激素检测,其中3例性激素水平紊乱。镜下病理组织学特点为典型的假小叶结构,小叶内可见上皮样细胞、短梭形细胞及特征性的印戒样瘤细胞;免疫组化结果显示肿瘤细胞Calretinin弥漫阳性(13/13),α-inhibin阳性(13/13),Vimentin弥漫阳性(13/13), Actin弥漫阳性(13/13), SMA弥漫阳性(13/13), Desmin阳性(11/13);CEA、P-CK均阴性;空泡/印戒样细胞苏丹Ⅲ灶性(+)、PAS(-)。网状纤维染色结果显示肿瘤细胞被网状纤维围绕。结论 卵巢硬化性间质瘤好发于20~30岁女性,在诊断上要与卵巢Krukenberg瘤及卵巢其它间叶源性肿瘤相鉴别,治疗采用手术切除,术后预后好,多无复发。
摘要:
目的 提高对先天性肺囊性腺瘤样畸形(CCAM)疾病的认识。方法 对我院2005年1月至2013年12月收治的6例CCAM患儿病例资料进行回顾性分析,总结该病临床特点。结果 6例中4例为新生儿,2例在胎儿期发现肺部病变,4例表现为气促,2例表现为咳嗽,5例合并肺部感染,1例脊柱裂,6例生后胸部CT检查均有特征性改变。经抗感染及吸氧等对症支持治疗,4例病情好转,1例行手术治疗。结论 CCAM的早期诊断及治疗可减少并发症,改善预后,而病情严重的需尽早外科治疗。
摘要:
目的 观察CO2激光联合超脉冲及点阵模式治疗结节性硬化症面部皮损的临床疗效,以及影响疗效的相关因素。方法 用CO2激光联合超脉冲及点阵模式治疗16例结节性硬化症患者面部皮损,观察、分析其疗效。结果 16例患者经平均5次治疗后痊愈率68.75%,有效率87.50%,未见瘢痕及色素沉着。随访3月,无复发。结论 CO2激光联合超脉冲及点阵模式治疗结节性硬化症面部皮损疗效确切,美容效果好,是一种安全有效的方法。
个案报告
摘要: