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2020年  51卷  第5期

本期专题执行主编简介
2020, 51(5): 1-1.
摘要(1186) HTML (608) PDF 358KB(34)
摘要:
神经再生调控与康复
摘要:
运动功能损伤大多阻断或干扰运动神经传导通路。本团队创新设计的多靶区磁刺激(magnetic stimulation, MS)技术通过刺激皮层和神经根,激活人体中枢和外周神经系统,目前已在科研和临床探索中取得初步疗效。机制研究涉及神经元的激活、神经传导、损伤区微环境的调节和基因调控等。然而,如何使MS技术在临床康复中实现更精准有效的神经修复,是神经调控目前面临的瓶颈问题,可能需要从神经环路重建和任务导向训练去突破。本专题聚焦“神经再生调控与康复”,旨在将神经再生与神经调控的理念运用于临床的康复治疗中,并为探索康复效果的神经生物学机制提供有力依据。本述评将通过多靶区协同增强神经环路调控技术在神经环路重建中发挥的重要作用展开思考,建立更精准有效的MS创新技术与临床路径,以期推动神经调控的基础和临床应用研究。
摘要:
经颅磁刺激(TMS)作为一项非侵入性神经调控技术,在研究大脑功能定位、调控认知功能、诊治神经/精神疾病等方面取得了一定成效,但其作用机制和生理效应未明确。血氧水平依赖的功能性磁共振成像(BOLD-fMRI)能反映脑组织的功能活动。实时交互式经颅磁刺激功能磁共振成像(TMS-fMRI)结合了TMS和BOLD-fMRI两种技术的优势,能够监测TMS刺激部位和与其存在功能连接的远端脑区兴奋性的改变。本文对实时交互式TMS-fMRI的应用和技术的进展、局限性和未来发展方向进行了综述。从应用上看,在大脑功能连接网络研究领域,TMS-fMRI能够显示在不同的实验中TMS对远端脑区产生的影响,并以100 ms的分辨率观察大脑网络间的动态连接,这是在探索时间特异性脑区功能连接方面取得的重要进展,但利用TMS-fMRI对脑区功能连接的空间特异性研究尚有不足,可以作为未来的研究方向;在脑区之间的相互作用探究中,TMS-fMRI能评估TMS对大脑皮层产生的影响以及脑区间的相互作用,帮助我们理解注意力控制背后的神经机制,研究大脑对躯体感觉的处理,但TMS-fMRI只能观察到TMS作用下不同脑区兴奋性之间的关联,而导致这一现象的机制以及脑区之间的关联有无特异性还待进一步研究;TMS-fMRI还能用于研究神经、精神疾病的发病机制和治疗效果,研究精神活性化合物对大脑区域影响,但目前TMS-fMRI还难以在临床中普及,下一步研究者们需要将目光放在TMS-fMRI临床适应症的研究当中。TMS-fMRI的一个主要技术难题是TMS线圈难以在MRI扫描仪内准确定位以刺激大脑皮层的特定区域,另一个重要问题是TMS线圈对静磁场产生影响造成图像伪影,导致回波平面图像的空间畸变和局部信号丢失。研究者们通过持续技术更新逐渐解决了线圈定位和图像伪影两大问题,但TMS-fMRI技术在参数设置、用户体验、应用的简便性和普适性等方面仍存在问题,这是未来的技术进步方向。
摘要:
  目的  探讨骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchyml stem cells, BMSCs)外泌体正常状态下对大鼠脑微血管内皮细胞的增殖和迁移的影响。  方法  提取大鼠BMSCs并进行鉴定,将其与脑微血管内皮细胞(bEnd.3细胞)通过Transwell小室共培养24 h(BMSCs共培养组);提取BMSCs外泌体进行鉴定,荧光显微镜下定性观察细胞吞噬外泌体的行为,CCK8 法检测细胞活力选定最佳BMSCs外泌体工作浓度,将其与bEnd.3细胞共培养24 h(BMSCs外泌体共培养组)。另设bEnd.3细胞单独培养组。培养24 h后通过EDU和细胞划痕实验,分别检测以上3组bEnd.3细胞的增殖和迁移能力。  结果  第3代BMSCs表面CD90、CD29为阳性,CD45显示为阴性,可成骨、成脂,表明所提取的BMSCs纯度较高。透射电镜下BMSCs外泌体形态为类圆形,直径在100 nm左右;NTA分析发现BMSCs外泌体的直径分布范围为50~600 nm,其中粒径峰值为150 nm;免疫荧光显示内皮细胞能够吞噬BMSCs外泌体;CCK8显示20 μg/mL外泌体加入对细胞增殖影响达到最佳。EDU检测显示,相较于对照组,BMSCs共培养组、BMSCs外泌体共培养组均可促进bEnd.3细胞的增殖(P<0.05),且促进增殖的能力相当(P>0.05)。细胞划痕实验示,BMSCs外泌体共培养组细胞的迁移率高于对照组(P<0.05),但与BMSCs共培养组差异不明显(P>0.05)。  结论  BMSCs外泌体可代替BMSCs,有效促进脑微血管内皮细胞的增殖和迁移,并为卒中后的血管新生提供新的潜在治疗手段。
摘要:
  目的  探讨小鼠星形胶质细胞外泌体对神经干细胞活力的影响。  方法  分离培养小鼠星形胶质细胞,收集细胞上清后超离出外泌体并予以鉴定。取原代培养的第2~6代神经干细胞,分别以0、20、40、60 μg/mL外泌体的条件培养基处理,CCK-8法筛选出培养神经干细胞的最佳外泌体质量浓度(40 μg/mL)。实验分为实验组(40 μg/mL外泌体处理的神经干细胞)和对照组(加入同等体积PBS处理的神经干细胞),干预72 h后,EdU试剂盒标记阳性干细胞数。利用Transwell模型,通过4',6-二脒基-2-苯基吲哚(4',6-diamidino-2-phenylindole, DAPI)染色,荧光显微镜下分别统计出Transwell下室的实验组和对照组的细胞核个数。  结果  ①星形胶质细胞外泌体的鉴定:通过电镜、蛋白免疫印迹实验、外泌体浓度粒径等技术鉴定细胞上清超离出的外泌体;②CCK8实验检测:随着外泌体质量浓度的增加,促进原代神经干细胞的增殖作用逐渐增强,且与对照组相比,40 μg/mL、60 μg/mL外泌体组对神经干细胞均有显著增殖作用,但此两组间比较无明显差异,所以选择40 μg/mL为最佳干预质量浓度;③EdU检测:实验组EdU标记阳性细胞数高于对照组(P<0.05);④Transwell模型中,实验组处理的神经干细胞从Transwell膜上层迁移到下层的细胞个数高于对照组(P<0.05)。  结论  小鼠星形胶质细胞外泌体可提高神经干细胞的生存活力。
摘要:
  目的  研究改良强制性运动对脑缺血再灌注模型大鼠运动功能恢复的作用及其机制。  方法  将大鼠随机分为对照组和改良强制性运动疗法(mCIMT)组,每组12只。采用Longa线栓法建立大鼠左侧大脑中动脉栓塞(MCAO)模型。mCIMT组在造模后7 d开始连续训练14 d,使用有弹性的的绷带将健肢绑于前胸,并在强制性转轮设备中进行患肢活动的训练,对照组大鼠不进行mCIMT训练,仅笼内自由活动。在造模后20 d内记录大鼠体质量,通过错步实验评定大鼠的行为学变化。在造模后18 d时处死部分大鼠,使用高效液相色谱法(high performance liquid chromatography, HPLC)检测脑运动皮层和纹状体内单胺类神经递质〔5-羟色胺(5-HT)、5-羟吲哚乙酸(5-HIVV)和高香草酸(HVA)〕和氨基酸类神经递质〔天门冬氨酸(ASP)、谷氨酰胺(Gln)、甘氨酸(Gly)、牛磺酸(Tau)、γ 氨基丁酸(GABA)〕含量,酶联免疫吸附(ELISA)法检测脑运动皮层和纹状体组织总p70核糖体蛋白S6激酶(p70s6k)蛋白和磷酸化蛋白(p-p70s6k)的表达水平。  结果  造模后21 d内,与对照组比较,mCIMT组大鼠体质量无明显变化(P>0.05),mCIMT组大鼠在造模后17 d时错步率下降(P<0.05);造模 后18 d时,与对照组比较,mCIMT组大鼠运动皮层中单胺类神经递质5-HIVV水平增加(P<0.05),运动皮层中氨基酸类神经递质的相对含量(与Glu之比)除ASP/Glu降低(P<0.05)外,其余氨基酸类神经递质包括Gln、Gly、Tau、GABA与Glu之比均增加(P<0.05或 P<0.01)。与对照组比较,mCIMT组大鼠运动皮层中p-p70s6k表达减少(P<0.05)。而对照组与mCIMT组大鼠纹状体中的单胺类神经递质和氨基酸神经递质差异均无统计学意义(P>0.05)。  结论  mCIMT具有一定的改善脑缺血再灌注模型大鼠运动功能的效果,其机制可能与提高大鼠脑运动皮层内氨基酸类神经递质和5-HIVV水平、减少p-p70s6k表达有关。
摘要:
本文报道1例脊髓损伤患者,术后康复期采用康复常规治疗+重复经颅磁刺激(rTMS)治疗,观察rTMS对肌张力障碍的影响。患者男性,66岁,8个月前从床上跌落,当时即感觉颈部疼痛,四肢活动障碍,躯干及四肢感觉消失。磁共振成像(MRI)检查提示脊髓损伤。全麻下行“颈前路减压植骨融合内固定术”,颈椎(C)内固定C3~C6,术后进行高压氧舱治疗和常规康复治疗。术后8个月因双下肢运动功能、平衡功能障碍、神经源性膀胱/直肠功能障碍要求进一步治疗入院。入院后采用常规康复+rTMS治疗,1次/d、5次/周,共4周。rTMS通过佩戴经颅磁刺激的定位帽进行治疗,刺激运动前区(取80%静息运动阈值,1 Hz,30 min),然后进行步行、平衡本体感觉、肌力训练、协调等训练。结果显示,经过4周的治疗和训练,患者MEP、sEMG、H反射等评估结果上均有改善。我们认为rTMS刺激运动前区改善脊髓损伤后肌张力障碍在此例报道中有效,今后可做进一步研究。
论 著
摘要:
  目的  探究血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)基因修饰的人骨髓间充质干细胞(human bone marrow mesenchymal stem cells, hBMSCs)对脑出血大鼠早期脑水肿的影响。  方法  体外培养hBMSCs和经体外构建的 VEGF 基因慢病毒载体稳定转染的hBMSCs(hBMSCs/VEGF)细胞。采用尾状核注射Ⅰ型胶原酶和肝素方式,制备脑出血动物模型。术后2 h对大鼠进行改良神经功能缺损(mNSS)评分,鉴定造模是否成功。将SD大鼠随机分为假手术组(仅进针不注射造模剂)、脑出血模型组、生理盐水组、hBMSCs组和hBMSCs/VEGF组。造模后第3天,hBMSCs组和hBMSCs/VEGF组大鼠分别按分组右侧尾壳核内注射细胞悬液(2×106个细胞/kg体质量)进行细胞移植,生理盐水组相同部位注射等量生理盐水,假手术组、模型组大鼠不进行干预。干预后3 d、7 d分别进行mNSS评分,处死大鼠,分离脑右侧尾壳核区脑组织标本,干湿重法检测脑组织标本含水量,HE染色观察脑组织标本病理改变,免疫荧光和Western blot检测VEGF、基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase, MMP-9)和水通道蛋白-4(aquaporin 4, AQP-4)表达。  结果  造模术后2 h,与假手术组大鼠比较,各组大鼠mNSS评分增高,均>8分,提示造模成功;在干预后3 d、7 d,模型组和NS组mNSS评分,脑组织含水量,MMP-9、AQP-4、VEGF蛋白表达高于假手术组(P<0.05),干预后相同时间点,hBMSCs组上述指标较NS组和模型组减少(P<0.001),hBMSCs/VEGF组上述指标高于hBMSCs组(P<0.05);光镜下模型组和NS组大鼠脑组织出现明显出血灶和梗死灶,结构紊乱疏松,水肿改变明显,hBMSCs组出血灶和梗死灶减小,而hBMSCs/VEGF组相较hBMSCs组,脑组织结构疏松,呈空泡状,神经元出现多数核固缩等凋亡改变。  结论  hBMSCs移植可改善脑出血大鼠神经功能缺损,减轻脑水肿,但hBMSCs经VEGF基因修饰后移植将增加血管通透性,加重脑出血大鼠的早期脑水肿。
摘要:
  目的  探究miR-382-5p过表达对人脑胶质瘤U251细胞恶性生物学行为的影响。  方法  将miR-382-5p mimic转染入U251细胞,逆转录-聚合酶链反应检测miR-382-5p、磷酸酶-张力蛋白同源物(PTEN) mRNA水平;生物信息学预测miR-382-5p与PTEN存在碱基结合位点,构建PTEN pcDNA载体过表达,荧光素酶报告实验检测miR-382-5p与PTEN靶向关系,将细胞随机分为4组:Control组、mimics组、pc-PTEN组和mimics+pc-PTEN组进行后续实验,逆转录-聚合酶链反应检测各组细胞PTEN水平;克隆形成法检测细胞增殖;逆转录-聚合酶链反应检测Ki67、 Survivin、 c-Myc mRNA水平;Transwell检测细胞侵袭能力;蛋白免疫印迹检测E-cadherin、N-cadherin、Vimentin蛋白表达水平。  结果  miR-382-5p和PTEN存在直接靶向作用关系,与Control组相比较,mimics组miR-382-5p mRNA水平升高(P<0.05),PTEN mRNA水平降低(P<0.05),细胞克隆形成率降低(P<0.05),Ki67、Survivin mRNA水平降低(P<0.05),c-Myc mRNA水平升高(P<0.05),细胞侵袭数降低(P<0.05),E-cadherin蛋白水平升高(P<0.05),N-cadherin、Vimentin蛋白水平降低(P<0.05)。pc-PTEN组miR-382-5p mRNA水平降低(P<0.05),PTEN mRNA水平升高(P<0.05),细胞克隆形成率升高(P<0.05),Ki67、Survivin mRNA水平升高(P<0.05),c-Myc mRNA水平降低(P<0.05),细胞侵袭数升高(P<0.05),E-cadherin蛋白水平降低(P<0.05),N-cadherin、Vimentin蛋白水平升高(P<0.05);与pc-PTEN组相比较,mimics+pc-PTEN组miR-382-5p mRNA水平升高(P<0.05),PTEN mRNA水平降低(P<0.05),细胞克隆形成率降低(P<0.05),Ki67、Survivin mRNA水平降低(P<0.05),c-Myc mRNA水平升高(P<0.05),细胞侵袭数降低(P<0.05),E-cadherin蛋白水平升高(P<0.05),N-cadherin、Vimentin蛋白水平降低(P<0.05)。  结论  miR-382-5p过表达介导PTEN的表达下调可抑制胶质瘤U251细胞增殖、侵袭、生长和上皮细胞-间充质转化。
摘要:
  目的  利用MRI扩散张量成像技术研究经鼻吸入苍艾挥发油对大鼠脑缺血再灌注损伤模型的神经保护作用。  方法  24只健康成年雄性 SD 大鼠,按照随机分配原则,分为假手术组、中动脉阻闭再灌注(middle cerebral artery occlusion, MCAO)组和苍艾挥发油(volatile oil of Cang Ai, VOCA)组。采用Zea Longa评分于造模后即刻和造模后第7天对各组大鼠神经功能损伤程度进行评估。用 7.0T磁共振对3组大鼠在造模成功后3 h、3 d、7 d行冠状位扩散张量成像(diffusion tensor imaging, DTI)扫描,对最大梗死层面的纹状体区和运动平层区DTI的表观扩散系数(apparent diffusion coefficient, ADC)和各向异性分数(fractional anisotropy, FA)进行测量,然后计算相对表观扩散系数(rADC)和相对各向异性分数(rFA)。造模7 d后采用 TTC 染色法对各组大鼠脑梗死体积进行评估,并对rFA、rADC与神经功能缺损评分进行相关性分析。  结果  假手术组苏醒后无神经功能缺损,MCAO组与VOCA组均有不同程度神经功能缺损,造模后7 d时VOCA组神经功能缺损评分小于MCAO组(P<0.05)。DTI扫描结果显示,造模后3 h以及3 d,VOCA组大鼠纹状体rADC值均高于MCAO组(P<0.05),7 d时3组无明显差异(P>0.05)。VOCA组运动皮层区rADC值在造模后3 h高于MCAO组(P<0.01),3 d、7 d时差异无统计学意义。VOCA组纹状体rFA值在造模后3 d和7 d均高于MCAO组(P<0.05)。MCAO组与VOCA组大鼠运动皮层区rFA值在3个时间点的组间差异均无统计学意义。TTC染色结果显示假手术组无梗死区,VOCA组脑梗死体积小于MCAO组(P<0.05)。相关性分析显示MCAO组和VOCA组大鼠纹状体rFA值(r=−0.847)、运动皮层rADC值(r=−0.647)、运动皮层rFA值(r=−0.660)与神经功能缺损评分均呈明显相关性(P<0.05)。  结论  VOCA在脑缺血再灌注后能有效通过降低缺血区细胞的毒性水肿及加快神经纤维束恢复来保护MCAO大鼠的神经功能。rFA、rADC值可作为评价脑缺血再灌注后神经功能恢复的有效指标。
摘要:
  目的  检测胰腺癌细胞、原位异种移植的原位胰腺癌小鼠模型和临床胰腺癌组织标本中铜转运蛋白1(copper transporter 1, CTR1)的表达,并验证铜螯合剂四硫代钼酸铵(ammonium tetrathiomolybdate, TM)通过调控胰腺癌细胞中CTR1的表达对胰腺癌的抑制效果。  方法  采用免疫组化法检测22例临床胰腺导管癌及距肿瘤0.5~1 cm的癌旁组织标本中CTR1和抗氧化蛋白1(ATOX1)的表达情况。采用PANC-1细胞构建5只原位胰腺癌裸鼠模型,收集胰腺癌组织中及对应的正常胰腺组织,免疫组化法检测CTR1和ATOX1的表达情况,与临床标本进行比较。采用10、30、50、100 μmol/L TM处理人胰腺癌细胞株PANC-1 24 h、48 h、72 h后,使用CCK-8法检测细胞增殖情况;50 μmol/L TM处理PANC-1 24 h、48 h后,划痕实验检测PANC-1细胞侵袭能力变化;10、30、50、100 μmol/L TM处理PANC-1 48 h后,Western blot检测CTR1、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)和细胞周期蛋白CyclinD1的表达。采用PANC-1细胞建立裸鼠皮下荷瘤模型,分别给予不同剂量TM(0.3 mg/d,1.0 mg/d)灌胃24 d后,观察肿瘤生长情况。  结果  免疫组化结果提示,22例临床胰腺导管癌患者组织标本中,19例(86.36%)出现CTR1高表达,且在PANC-1裸鼠原位移植瘤组织中CTR1同样高表达。使用TM处理PANC-1细胞后,细胞增殖抑制程度随着TM剂量的升高、处理时间的延长而逐渐增强;细胞迁移能力下降;胞内CTR1、VEGF和CyclinD1的表达均随着TM剂量的升高而降低。PANC-1荷瘤裸鼠在给予不同剂量TM后,肿瘤生长出现抑制,TM高剂量组的肿瘤体积和肿瘤质量减小更为明显(P<0.05)。  结论  胰腺癌中CTR1表达异常增高,针对这一靶点使用铜螯合剂治疗可能有助于抑制胰腺癌生长迁移。
摘要:
  目的  探索桑辛素对喉癌干细胞干性表型调控的影响。  方法  流式细胞仪分选并检测CD133+喉癌干细胞比例;肿瘤球形成实验检测CD133+喉癌干细胞的自我更新能力;Transwell实验检测CD133+喉癌干细胞的迁移能力;改良MTT实验检测化疗药物对CD133+喉癌干细胞的细胞毒性作用;免疫荧光染色、实时荧光定量PCR(RT-qPCR)及Western blot检测CD133+喉癌干细胞的干细胞标志物表达;在不同浓度的桑辛素处理CD133+喉癌干细胞后(以桑辛素0 μmol/L为对照),通过肿瘤球形成实验、Transwell实验、改良MTT实验及Western blot,分别检测CD133+喉癌干细胞的自我更新能力、迁移能力、化疗药物的细胞毒性作用及干细胞标志物表达变化。  结果  流式细胞仪分选结果显示,CD133+喉癌干细胞占喉癌细胞的比例为(3.50±0.34)%;经过培养富集后,其比例可达(93.20±5.23)%。肿瘤球形成实验结果显示,与喉癌细胞相比,CD133+喉癌干细胞具有增强的自我更新能力 (P<0.001);Transwell实验显示,与喉癌细胞相比,CD133+喉癌干细胞的迁移能力增强(P<0.05);改良MTT实验结果显示,与喉癌细胞相比,CD133+喉癌干细胞抵抗化疗药物(5-氟尿嘧啶及顺铂)的细胞毒性作用(P<0.05);免疫荧光染色、RT-qPCR及Western blot结果显示,干细胞标志物(CD133、ALDH1、Sox2、ABCG2及N-cadherin)在CD133+喉癌干细胞中呈高表达水平。通过不同浓度的桑辛素处理CD133+喉癌干细胞,其自我更新能力降低(P<0.05);迁移能力亦下降(P<0.05);此外,桑辛素处理的CD133+喉癌干细胞对化疗药物的细胞毒性作用更加敏感(P<0.05);Western blot结果显示,不同浓度的桑辛素处理的CD133+喉癌干细胞,其上述的干细胞标志物表达水平下调(P<0.05)。  结论  CD133+喉癌干细胞具有干性表型特征;桑辛素可减弱喉癌干细胞的干性表型,可能与下调其干细胞标志物表达相关。
摘要:
  目的  探讨6-姜酚(6-G)预处理是否能够减轻乏氧/复氧(H/R)诱导的H9C2细胞损伤及相关机制。  方法  采用常规方法制备心肌细胞H/R体外模型〔H9C2细胞加入经氮气饱和后的乏氧液后放于培养箱,通入混合气体(体积分数1%O2,5%CO2,94%N2)作用15 min,培养3 h后取出细胞,置于常氧培养箱(37 ℃,体积分数5%CO2)进行复氧培养1 h〕。在建立心肌细胞H/R体外模型前给予6-G预处理,采用MTT法测定细胞活力,并筛选6-G干预下细胞活力最大的6-G质量浓度进行后续实验。采用DCFH-DA荧光探针检测6-G预处理对H9C2氧化应激水平的影响,荧光显微镜以及流式细胞仪观察细胞内氧化应激的作用。Western blot法检测H/R诱导细胞炎症反应因子中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)、白介素-1β(IL-1β)表达的变化。  结果  与H/R组相比,6-G+H/R组细胞活力从 50 μg/mL 6-G 组开始上升,200 μg/mL 6-G时细胞活力最大,后续实验选6-G干预质量浓度为200 μg/mL。与对照组相比,200 μg/mL 6-G组活性氧(ROS)含量无明显变化(P>0.05),ROS荧光波峰未见明显迁移,H/R组ROS的含量升高,差异有统计学意义(P<0.05),ROS荧光波峰向右侧迁移,与H/R组相比,6-G+H/R组ROS含量降低,差异有统计学意义(P<0.05),ROS荧光波峰向左侧回移。与对照组相比,6-G组TNF-α、IL-6、IL-1β的表达无明显变化(P>0.05);H/R组TNF-α、IL-6、IL-1β的表达升高,差异有统计学意义(P<0.05);与H/R组相比,6-G+H/R组TNF-α、IL-6、IL-1β的表达降低,差异有统计学意义(P<0.05)。  结论  6-G预处理能够减轻H/R诱导的H9C2心肌细胞损伤,其机制可能与抑制氧化应激和炎症反应有关。
摘要:
  目的  探讨芍药苷(paeoniflorin, PF)对脓毒症所致急性肺损伤的影响及其与转录因子NF-E2相关因子2(nuclear factor erythyroid 2-related factor 2, Nrf2)/Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1(Keap1)信号通路的关系。  方法  采用盲肠结扎穿孔(CLP)术诱导建立脓毒症大鼠模型。将大鼠随机分成假手术组(Sham)、模型组(Model)、低剂量PF组(L-PF,50 mg/kg)、高剂量PF组(H-PF,150 mg/kg)及高剂量PF+Nrf2抑制剂组(H-PF+ML385,150 mg/kg PF+30 mg/kg ML385),每组10只。采用改良的脓毒症严重程度评分标准对大鼠脓毒症严重程度进行评分;HE染色观察大鼠肺组织病理变化;黄嘌呤氧化酶法测定大鼠肺组织超氧化物歧化酶(SOD)活性;硫代巴比妥酸法测定大鼠肺组织丙二醛(MDA)含量;ELISA法检测肺组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白介素(IL)-1β和IL-6水平;Western blot和qRT-PCR分别检测肺组织中Nrf2、Keap1、血红素氧合酶1(HO-1)蛋白和mRNA的表达水平。  结果  与Sham组比较,Model组大鼠出现严重的脓毒症;肺组织出现严重炎症浸润,出现大量巨噬细胞,肺间质肿大;肺组织中促炎因子IL-1β、TNF-α、IL-6及氧化指标MDA含量均上升(P<0.05),而抗氧化指标SOD含量下降(P<0.05);Nrf2及HO-1蛋白和mRNA表达均降低(P<0.05),Keap1蛋白和mRNA表达增加(P<0.05)。与Model组比较,PF给药组大鼠脓毒症程度均降低,肺组织损伤均得到改善,肺组织中IL-1β、TNF-α、IL-6及MDA含量均下降(P<0.05),SOD活性均增加(P<0.05);Nrf2及HO-1蛋白和mRNA表达均增加(P<0.05),Keap1蛋白和mRNA表达降低(P<0.05)。与H-PF组比较,Nrf2抑制剂ML385干预后可抑制PF对脓毒症大鼠上述指标的改善。  结论  PF通过激活Nrf2/Keap1信号通路,降低组织氧化应激与炎症水平,改善脓毒症所致的急性肺损伤。
摘要:
  目的  探讨非诺贝特在单侧输尿管结扎诱导的小鼠肾纤维化中的作用机制,为肾纤维化提供潜在的治疗靶点。  方法  成年雄性C57BL/6J小鼠31只,随机分为假手术组(Sham组,n=9)、单侧输尿管结扎组(UUO组,n=10)和单侧输尿管结扎+非诺贝特治疗组(UUO+Feno组,n=12)。UUO组及UUO+Feno组小鼠均结扎左侧输尿管,Sham组小鼠仅游离左侧输尿管,不做结扎处理。术后第二日起,UUO+Feno组每日给予10 mg/kg (终浓度为0.08 mg/mL)的非诺贝特溶液灌胃,持续14 d;其余两组每日灌胃等量生理盐水。术后第15 天灌胃结束后处死小鼠取材,检测血清肌酐和尿素氮,肾组织行HE染色、Masson染色和Sirius Red染色,检测肾组织羟脯氨酸含量,免疫组化染色检测肾组织α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原(COLⅠ)蛋白表达,Western blot法检测肾组织α-SMA、COLⅠ蛋白表达变化,实时荧光定量(RT)- PCR法检测肾组织纤维化相关基因基质金属蛋白酶(MMP)2、MMP9、COLA1、COLA2、基质金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)、转化生长因子-β1(TGF-β1)、α-SMA mRNA的表达变化。  结果  与Sham组相比,UUO组小鼠血清肌酐及尿素氮水平升高(P<0.05);与UUO组相比,UUO+Feno组小鼠血清肌酐及尿素氮水平降低(P<0.05)。HE染色、Masson染色、Sirius Red染色以及肾羟脯氨酸含量的结果均表明UUO组较Sham组胶原沉积明显增多,炎性细胞浸润明显,UUO+Feno组较UUO组胶原沉积程度显著减轻,炎性细胞浸润程度显著改善,对肾纤维化的启动阶段有抑制作用。免疫组化结果显示:与Sham组相比,UUO组 α -SMA、COLⅠ在肾组织中的表达水平升高(P<0.05);与UUO相比,UUO+Feno组α-SMA、COLⅠ在肾组织中的表达水平降低(P<0.05);RT-PCR和Western blot结果显示:与Sham组相比,UUO组纤维化相关因子的mRNA及α-SMA、COLⅠ蛋白表达水平均升高(P<0.05);与UUO组相比,UUO+Feno组纤维化相关因子的mRNA及蛋白表达水平均降低(P< 0.05)。  结论  非诺贝特通过调控与肾脏纤维化相关因子的表达水平改善肾脏纤维化。
摘要:
  目的  验证结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis, Mtb)基因Rv2626c编码的低氧反应蛋白1(hypoxic response protein 1, HRP1)为分泌蛋白。  方法  从Mtb H37Rv标准毒力株基因组上扩增目的基因并添加His标签;运用扩增产物构建重组质粒,电转入耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis, Ms)(MC2 155)构建重组菌;热诱导重组菌表达蛋白,检测培养滤液及细菌裂解液中蛋白的表达情况,将10 kDa培养滤液抗原(CFP-10)(Ms)和CFP-10(Mtb)设为阳性对照,将胞质蛋白热休克蛋白65(GroEL2)(Mtb)作为阴性对照。  结果  PCR成功扩增 HRP1 、GroEL2(Mtb)、CFP-10(Mtb)、CFP-10(Ms),并且重组质粒测序峰单一且信号稳定,鉴定重组质粒构建成功。成功构建重组Ms并实现蛋白GroEL2(Mtb)、CFP-10(Mtb)、CFP-10(Ms)、HRP1在Ms中的表达。在重组菌裂解液中和培养基滤液中均检测到目标蛋白HRP1;结果与阳性对照CFP-10一致;阴性对照GroEL2(Mtb)仅在细菌裂解液中检测到,在培养滤液在未检测到。  结论  Mtb基因Rv2626c编码的蛋白HRP1可以通过Ms的分泌系统分泌到细菌外,作为Mtb分泌蛋白,在Mtb致病机制中发挥作用。
摘要:
  目的  了解西南地区孕妇孕期奶类摄入现况,探讨孕期奶类摄入量与新生儿出生体质量的关系。  方法  采用前瞻性研究,选取成都市某三甲妇幼医疗机构产前门诊孕8~14周单胎健康妇女为研究对象。通过3 d 24小时膳食回顾法分别于孕8~14周、孕24~28周及孕32~36周收集孕早、中、晚期奶及奶制品的摄入信息,计算总奶类摄入量和饮奶率;参照《中国孕期妇女膳食指南(2016)》的奶类推荐量(300 g/d)为标准计算达标率,同时将研究对象分为不饮奶组、饮奶不足组和饮奶适宜组。利用医院信息系统收集分娩孕周、新生儿出生体质量等资料。应用多因素非条件logistic回归模型分析孕期奶类摄入量与新生儿出生体质量的关系。  结果  最终纳入962例有效样本。孕早、中、晚期平均奶类摄入量〔中位数(P25,P75)〕分别为125.0(0,236.1) g/d、208.3(0,284.7) g/d、250.0(150.0,416.7) g/d,达标率分别为12.6%、33.2%和48.4%。平均新生儿出生体质量为(3 225.0±399.8) g,小于胎龄儿发生率为8.3%,大于胎龄儿发生率为3.9%。孕中期饮奶适宜组发生小于胎龄儿的风险较不饮奶组降低〔相对危险度(odds ratio, OR)=0.786,95%置信区间(confidence interval, CI):0.385~0.976〕。孕晚期饮奶不足组和饮奶适宜组发生小于胎龄儿的风险较不饮奶组降低(分别为OR=0.672,95%CI:0.477~0.821和OR=0.497,95%CI:0.116~0.807)。未观察到孕早期奶类摄入量与新生儿出生体质量和孕中、晚期奶类摄入量与大于胎龄儿发生风险有关。  结论  西南地区孕妇各孕期奶类摄入不足问题突出,亟待改善。孕期奶类摄入与新生儿出生体质量有关,孕中、晚期奶类摄入量增加可能降低小于胎龄儿发生的风险。
摘要:
  目的  分析2013−2019年四川省手足口病(hand foot and mouth disease, HFMD)的流行特征,研究气象学因素与HFMD发病率的相关性,并构建预测模型。  方法  通过中国疾病预防控制中心和中国气象数据网收集2013−2019年四川省HMFD监测数据和气象数据。采用Spearman相关分析探究HFMD月发病率与气象学因素的关系,同时采用多元回归模型和支持向量回归(support vector regression, SVR)模型分别构建HFMD月发病率预测模型。  结果  2013−2019年四川省累计报道HFMD 615 840例,死亡病例81例,年均发病率107.31/105,死亡率0.16/106。Spearman相关分析显示月平均相对湿度(r=0.342)、月平均气温(r=0.284)、月平均水汽压(r=0.304)、月平均降水天数(r=0.259)与HFMD月发病率呈正向弱相关。多元回归模型预测结果(R2=0.375)准确性不如SVR模型(R2=0.836),SVR模型对2013−2018年HFMD月发病率有较好的拟合,能较好地预测2019年发病高峰。  结论  月平均相对湿度对HFMD月发病率影响最大;SVR模型的拟合值与实际值吻合度较高,对四川省HFMD发病情况预测具有一定价值。
摘要:
  目的  探究EQ-5D-5L量表应用于我国西南地区人群中生命质量评价的信度和效度。  方法  采用克朗巴哈α系数(Cronbach’s α)测量量表的内部一致性信度,探索性因子分析结合验证性因子分析测量结构效度、聚敛效度和区分效度。  结果  Cronbach’s α系数为0.857,探索性因子分析提取2个方差累计贡献率为77.311%的公因子,第一公因子代表行动能力、自己照顾自己能力和日常活动能力,第二公因子代表疼痛或不舒服、焦虑或抑郁。验证性因子分析两个公因子的相关性为0.659,第一公因子平均方差变异为0.862且组合信度为0.949,第二公因子的平均方差提取值为0.587且组合信度为0.739,四处走动、自我照顾和日常活动在第一公因子上的载荷分别为0.871、0.945和0.967,疼痛或不舒服、焦虑或沮丧在第二公因子上的载荷分别为0.708和0.820。  结论  EQ-5D-5L在应用于西南地区居民测量生命质量有较好的信度和效度。
技术与方法
摘要:
  目的  建立固相萃取-高效液相色谱串联质谱(high performance liquid chromatographic tandem mass spectrometric, HPLC-MS/MS)同时测定尿液中8种芳香化合物代谢物(苯巯基尿酸、甲基马尿酸、N-乙酰基-S-苯基-L-半胱氨酸、苯乙醛酸、苯乙醇酸、对氨基酚、对硝基酚和1-羟基芘)的方法。  方法  取1 mL尿液,加入20 μL β-葡萄糖醛酸酶和1 mL乙酸铵缓冲溶液,在37 ℃孵箱中酶解20 h。酶解后混匀,取适量酶解液注入PrimeHLB 固相萃取柱净化,4 mL乙腈洗脱,洗脱液氮吹至干,用0.20 mL甲醇复溶后进样HPLC-MS/MS系统分析。高效液相色谱分离采用反相C18色谱柱(2.1 mm×150 mm,3.5 μm),流动相A为含体积分数0.1%甲酸的水,流动相B为甲醇,采用梯度洗脱,流速为0.2 mL/min。质谱采用正、负离子交替扫描方式,多反应监测(multiple reaction monitoring, MRM)模式检测,内标标准曲线法定量。  结果  8种代谢物在 1~100 ng/mL范围内线性良好,相关系数均大于0.995,测定的精密度(relative standard deviation, RSD)在0.05%~9.95%之间,8种代谢物的检出限在0.041~0.12 ng/mL范围内。将所建立的方法用于尿样分析,加标回收率为80.1%~114.0%。  结论  所建立的方法灵敏、快速、准确,适用于普通人群和职业人群的芳香化合物生物监测评估。
临床医学
摘要:
  目的  比较局部晚期鼻咽癌患者采用EPF(表柔吡星、顺铂及氟尿嘧啶)诱导化疗联合CNRT(放疗同步尼妥珠单抗)方案或DPF(多西他赛、顺铂及氟尿嘧啶)诱导化疗联合CCRT(同步放化疗)方案的早期生存结果差异。  方法  收集2010年3月−2017年9月我院收治的局部晚期鼻咽癌(Ⅲ期至Ⅳb期)患者,主要研究终点为无疾病生存(disease-free survival, DFS),次要研究终点包括远处无转移生存(distant metastasis-free survival, DMFS)、局部无复发生存(local recurrence-free survival, LRFS)、总生存(overall survival, OS)以及治疗相关不良反应。采用倾向性评分匹配平衡两组间临床特征的差异。采用Kaplan-Meier法和log-rank检验比较两组的生存差异。采用多因素Cox比例风险模型筛选潜在的独立预后因素。  结果  经匹配后,共纳入153例患者,其中EPF联合CNRT组51例,DPF联合CCRT组102例。在2年无进展生存(82.4% vs. 85.3%,P=0.880)、LRFS(100.0% vs. 92.1%,P=0.278)、DMFS(82.3% vs. 88.2%,P=0.120)、OS(88.2% vs. 96.0%,P=0.410)方面,EPF联合CNRT组与DPF联合CCRT组相比无明显差异。治疗方案(EPF联合CNRT与DPF联合CCRT)不是DFS的独立预后因素。亚组分析中,在T3〔风险比(hazard ratio, HR)=0.174,95%置信区间0.031~0.959,P=0.045〕、N1/N2HR=0.432,95%置信区间0.197~0.946,P=0.036)、男性(HR=0.437,95%置信区间0.195~0.978, P=0.044)人群中,EPF联合CNRT方案相较于DPF联合CCRT方案可减少病情进展风险。同步放疗期间,在3~4级中性粒细胞减少方面,EPF联合CNRT组较DPF联合CCRT组发生率低(P=0.007)。  结论  与DPF联合CCRT方案相比,EPF联合CNRT方案可带来相似的生存获益,但T3、N1/N2、男性局部晚期鼻咽癌患者可能从EPF联合CNRT治疗方案中获益,且耐受性良好。
摘要:
  目的  探讨重症监护病房(intensive care unit, ICU)中脓毒症患者发生急性肾损伤(acute kidney injury, AKI)相关的危险因素。  方法  回顾性分析2009年3月−2016年6月收治于四川大学华西医院ICU的脓毒症患者资料。收集患者一般资料、基础疾病史、ICU住院天数、并发症、实验室资料等相关数据。通过单因素及多因素logistic回归分析模型分析筛选出脓毒症并发AKI(sepsis associated-acute kidney injury, SA-AKI)发生的独立危险因素。  结果  共纳入符合标准的脓毒症患者2 331例,其中636例发生AKI,1 695 例未发生AKI。多因素logistic回归分析结果显示,年龄>40岁〔比值比(odds ratio, OR)=2.752〕,基础疾病包括糖尿病(OR=2.563)、高血压/冠心病(OR=1.851)、慢性肾脏病(OR=15.876),住院期间并发心力衰竭(OR=2.295)、急性呼吸窘迫综合征(OR=2.067)、重症急性胰腺炎(OR=2.725)、低血压(OR=2.140)、低蛋白血症(OR=1.596)、乳酸性酸中毒(OR=2.164)、器官衰竭数>1个(OR=4.480),白细胞>10×109 L-1OR=4.166), 基础肌酐值(OR=4.401)、降钙素原(OR=1.816)、胱抑素C(OR=7.046)较高,轻度(OR=2.107)、中度(OR=3.817)、重度(OR=6.091)贫血均为发生SA-AKI的独立危险因素。  结论  在ICU中,慢性肾脏病史、胱抑素C较高和器官衰竭等多种危险因素与SA-AKI的发生有关,认识SA-AKI的危险因素并进行监测,进而早期预防AKI的发生,可以改善脓毒症患者的预后。
摘要:
  目的  分析总结IgG4相关性疾病(IgG4-related disease, IgG4-RD)患者临床、病理特征及诊治经验。  方法  回顾性分析2013年1月−2017年12月四川大学华西医院收治的43例IgG4-RD患者的临床资料(包括临床表现、实验室检查、影像学及病理学检查,诊断、误诊及治疗情况)。  结果  43例IgG4-RD患者中,男女性别比为3∶1,年龄(51.3±15.9)岁,临床表现为腹痛、黄疸、乏力等消化道症状者11例(IgG4相关性胆管炎5例,IgG4相关性自身免疫性胰腺炎6例),占25.6%;眶周受累患者10例,占23.3%,淋巴结肿大患者9例,占20.9%,发热患者6例,占14.0%;42例患者行免疫自身抗体检查,抗核抗体(ANA)升高14例;40例患者行免疫球蛋白检查,IgG升高25例,IgA升高12例,IgE升高29例;6例患者行直接抗人球蛋白实验,4例为阳性;血清免疫球蛋白G4亚型检测显示,35例患者高于1 350 mg/L;影像学检查显示,眶周受累患者CT特征为眼眶内软组织结节;胆道及胰腺受累患者腹部增强CT扫描特征为肝内胆管扩张、胆总管扩张,管壁增厚强化,管腔变窄,胰腺受累显示胰腺肿大或软组织密度影;组织病理学检查免疫组化染色表现为IgG4阳性细胞(3~>500个/高倍视野)浸润,淋巴细胞CD20、CD3ε或浆细胞CD138阳性。43例患者中5例因误诊行手术治疗。所有患者确诊后采用激素及免疫抑制剂等药物治疗,临床症状均好转。  结论  IgG4-RD临床表现多样,累及多器官,临床上应加强对IgG4-RD的规范诊断和治疗。
摘要:
  目的  探讨经导管栓塞治疗胃肠间质瘤合并消化道出血的临床疗效。  方法  将2006年6月−2019年6月因消化道出血于我院行经导管栓塞治疗的17例胃肠间质瘤患者纳入研究,回顾性分析栓塞治疗的技术成功率和临床成功率。  结果  17例患者在栓塞治疗前行血管造影,5例(29.4%)显示肿瘤染色及造影剂外溢,9例(52.9%)显示肿瘤染色但没有明显造影剂外溢,3例(17.6%)显示阴性。14例血管造影阳性患者经导管栓塞治疗后13例(76.5%)技术成功,1例(5.9%)技术失败,予急诊剖腹探查行根治性切除;3例血管造影阴性患者技术弃权。13例技术成功患者中,12例(70.6%)获得临床成功,1例(5.9%)发生反复消化道出血,经保守治疗后好转。无1例患者发生栓塞术后并发症。栓塞术后随访30 d死亡率为0。  结论  经导管栓塞治疗胃肠间质瘤合并消化道出血是一种安全、有效的微创技术方法。
摘要:
本文报道2例高度角膜散光、且为混合散光患儿在睫状肌麻痹后验光均出现散光显著增加。结合患儿眼屈光性质、角膜地形图及像差分析,提出瞳孔直径改变带来的像差变化、不同直径范围的角膜散光差异、睫状肌麻痹前后晶体散光的改变均可能导致睫状肌麻痹后散光增加。我们发现,对于高度角膜散光,尤其是混合散光的儿童,睫状肌麻痹验光结果不一定能精确反映患儿日常生活中的屈光状态。由于患儿需要的是自然瞳孔状态下的屈光矫正,因此,我们建议,不能直接采用睫状肌麻痹后的验光结果作为此类患儿的配镜处方,需结合角膜地形图,参考自然瞳孔状态下的复光结果制定最终的配镜处方。
摘要:
促结缔组织增生性小圆细胞肿瘤(desmoplastic small round cell tumor, DSRCT)是一种好发于青少年的罕见恶性肿瘤,早期诊断困难,预后差。本文报道的1例DSRCT患者腹部包块超声表现为腹内病灶巨大,呈实性,边界欠清楚,形态不规则,内部无明显液化及钙化,血供不丰富。其包绕血管生长,但未见确切侵犯血管征象;肿瘤发生肝内及腹内淋巴结转移,肝内转移灶可见周边低回声晕;肿瘤包块压迫推挤邻近组织器官,引起双肾积水,对骨有破坏浸蚀征象。分析总结 DSRCT的超声表现可提高临床对该疾病的认识,为诊断提供超声影像依据。
摘要:
患者,女性,21岁,因“停经35+4周,胎动消失1 d”入院。孕30周在院外胎儿系统彩超提示:胎儿腹裂畸形。孕32+1周在我院腹部针对彩超示:胎儿腹壁回声连续性中断4.5 cm,肠管及部分内脏漂浮于羊膜腔内,考虑胎儿发育异常(腹裂畸形)。此次来我院行胎儿监护示无应激试验(NST)无反应型,以“胎儿宫内窘迫”收入院。入院后孕妇及家属选择行剖宫产及产时即行新生儿先天性腹裂修复手术,术前请麻醉科、新生儿科、小儿外科等相关科室会诊,于全麻下行剖宫产术,娩出一活女婴。胎儿娩出后,由小儿外科同时行产时手术,术后患儿腹壁张力稍高,但未明显影响通气,术后转新生儿科,予禁食、补液、胃肠减压、抗感染等治疗,患儿腹胀逐渐减轻,予肠内营养无不适后出院。随访至今,患儿生长发育尚可,无切口感染、裂开、肠坏死、腹壁疝等并发症。对于先天性腹裂,应完善孕期检查,早期诊断,及时将腹裂胎儿的孕母转诊至有条件的医院,以便对有Ⅰ期修复条件的腹裂患儿施行产时手术或早期行Ⅰ期修复手术,改善患儿预后,降低病死率。