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  • 神经再生与调控康复的未来方向

    星形胶质细胞除提供营养、支持和保护作用外,在神经系统疾病病理过程中的其它重要作用也逐渐被揭示,如参与微环境调节和再生修复。近年来研究提示外泌体在中枢神经系统疾病诊断和治疗中,起到非常重要的作用。而来源于星形胶质细胞的外泌体能否对脑部内源性神经干细胞的功能产生影响?特别是在发病急性期可否减轻神经损伤,促进神经保护和修复? 这些问题非常值得研究。从组织修复和机体康复的角度,卒中早期有效的神经保护直接影响其后期的功能康复,促进神经保护是减少残疾的关键。本专题相关星形胶质细胞的研究通过分离原代鼠源神经干细胞和星形胶质细胞,并用超速离心鉴定出星形胶质细胞分泌的外泌体,进而对其在细胞间的通讯功能作了初步探索,具有十分重要科学价值和潜在的临床意义。

  • 外科微创化与微创外科专业化

    外科微创技术起步于30余年前,微创理念带来外科领域革命性的变化。随着高清腹腔镜、机器人辅助外科手术系统等设备的临床运用和手术技术的进步,从早期的单纯胆囊切除发展至今,微创技术普及到外科所有领域,腹腔镜胃癌根治术、肠癌根治术、肝切除等已成为大型医疗中心常规开展项目。但在胰腺外科,由于胰腺解剖结构深在、手术操作流程复杂、吻合重建多,开放的胰腺手术也存在较高的并发症发生率和死亡率。此外,临床上可切除的胰腺肿瘤病例也远少于其它专业,导致胰腺外科手术学习曲线漫长,一名成熟的胰腺外科医生成长时间也长于其它专业。因此胰腺外科的微创手术虽与其它专业同时起步,但发展缓慢。可喜的是,近十年来,随着微创技术设备的发展、电能量平台的研制及超声刀的运用,以及对胰腺精细化解剖更深入认识,胰腺外科微创技术迎来了高速发展的十年。目前国内开展微创胰十二指肠切除术(包括机器人辅助和全腹腔镜)总例数超过200例的医疗中心已有十余家,而本专题作者所在的三家医疗机构(四川大学华西医院胰腺外科、上海交通大学医学院附属瑞金医院胰腺外科、中国人民解放军总医院第一医学中心肝胆外二科)完成的总例数均超过600例,属于具有代表性的大型医疗中心。目前虽然胰腺微创手术在一些大型医疗中心已成为常规,但一些中小型医疗机构由于病例数少,掌握胰腺微创技术的学习时间曲线又长于其他专业领域,因此该技术距离普及还有很长的路要走,由彭兵教授主持的“胰腺微创手术”专题应运而生。本专题的作者们总结开展胰腺微创手术的成熟经验,将手术技术流程化、专业化,同时也介绍了复杂条件下胰腺手术中的血管切除重建技术,构成了这期专刊的丰富内容,并对胰腺微创手术的现状及发展方向作了深入浅出的阐释。

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摘要:
目的 研究黄芪甲苷(AS-Ⅳ)对新生大鼠心肌细胞缺氧/复氧(H/R)损伤的保护作用,并探讨其潜在的作用机制。 方法 提取并培养新生大鼠心肌细胞,随机分为对照组,H/R组,H/R+低、中、高浓度AS-Ⅳ(AS-Ⅳ终浓度0.1 μmol/L、1 μmol/L、10 μmol/L)组,和H/R+高浓度AS-Ⅳ(10 μmol/L)+AKT抑制剂(5 μmol/L)组6组。H/R前分组预处理心肌细胞(对照组和H/R组不进行预处理)48 h后,除对照组外,其余各组心肌细胞建立细胞H/R损伤模型。MTT法检测各组心肌细胞活力,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测自噬基因LC3-II、p62的表达,Western blot 检测LC3-Ⅱ、P62蛋白和磷脂酰肌醇3激酶/丝氨酸苏氨酸蛋白激酶(PI3K/AKT)通路蛋白〔包括AKT、磷酸化(p-)AKT(p-AKT)、p-雷帕霉素(p-mTOR)〕和自噬启动因子未配位的51样激酶1(ULK1)的表达,免疫荧光染色检测心肌细胞自噬体P62的表达。 结果 AS-Ⅳ在本研究低、中、高浓度范围内以浓度依赖的方式改善H/R损伤下心肌细胞活力,并抑制H/R损伤后的心肌细胞自噬基因LC3-Ⅱ和p62 mRNA和蛋白的表达,抑制ULK1蛋白的表达(P<0.05),添加AKT抑制剂后,AS-Ⅳ的以上作用被部分抑制(P<0.05)。AS-Ⅳ对AKT和mTOR蛋白的表达没有影响(P>0.05),但可以促进AKT和mTOR的磷酸化(P<0.05)。免疫荧光染色检测结果显示,高浓度AS-Ⅳ可以逆转H/R损伤诱导的自噬体P62的表达。 结论 AS-Ⅳ对H/R损伤心肌细胞具有保护作用,其作用机制可能是通过激活PI3K/AKT途径中的mTOR信号降低自噬水平,从而预防H/R损伤。
摘要:
目的 合成3种芦荟大黄素金属配合物,并比较配体和配合物的抗氧化活性。 方法 在无水乙醇溶剂中,通过溶解、搅拌合成芦荟大黄素-铁(Ⅱ)、芦荟大黄素-铜(Ⅱ)、芦荟大黄素-镁(Ⅱ)3种配合物,并对其结构进行表征,采用Fe2+-H2O2-亚甲蓝法、二苯代苦味肼基自由基法(DPPH法)等检测配体和配合物对超氧自由基(O2•)、羟基自由基(•OH)、二苯代苦味肼基自由基(DPPH•)的清除作用。 结果 成功合成芦荟大黄素-铁(Ⅱ)、芦荟大黄素-铜(Ⅱ)、芦荟大黄素-镁(Ⅱ)3种配合物,根据结构表征结果,推测芦荟大黄素金属配合物可能结构为两分子芦荟大黄素通过9位羰基和8位羟基与一分子金属离子(Fe2+、Mg2+、Cu2+)形成配合物。配合物和配体对3种自由基均有清除作用,但配合物的清除作用强于其配体(P<0.05)。 结论 芦荟大黄素与Fe2+、Cu2+、Mg2+3种金属离子配位后,增强了其配体本身的抗氧化活性。
摘要:
目的 探讨健康人群屈指肌腱A1滑车厚度及其影响因素。 方法 应用高频超声观察90例健康人双侧手指屈指肌腱的10个A1滑车的声像图,并测量其厚度,同时记录每个人的性别、年龄、身高、体质量及体质量指数。分析手指A1滑车厚度的影响因素。 结果 高频超声能够清晰显示A1滑车结构;双侧手指A1滑车厚度差异无统计学意义(P>0.05)。正常各手指A1滑车厚度差异有统计学意义(P<0.05),进一步比较发现A1滑车厚度可分为两个子集:拇指和小指〔(0.196±0.051) mm〕、食指中指和环指〔(0.230±0.055) mm〕,前者厚度较后者薄;A1滑车厚度与年龄正相关(r=0.468,P<0.001)。拇指与小指在<19岁、20~49岁、≥50岁的正常参考值范围分别为0.09~0.23 mm、0.12~0.30 mm、0.12~0.32 mm;食指、中指及环指在<19岁、20~49岁、≥50岁的正常参考值范围分别为0.11~0.27 mm、0.15~0.35 mm、0.17~0.35 mm。不同性别、不同体质量指数的A1滑车厚度差异无统计学意义(P>0.05)。 结论 A1滑车厚度的影响因素为部位、年龄。高频超声可以清晰观察及测量A1滑车,成为A1滑车病变定量评价的候选手段。
摘要:
目的 探讨新型化学成分明确培养基(chemically defined medium, CDM)对牙乳头细胞(dental papilla cells, DPCs)成骨分化潜能及体内牙周骨再生的影响。 方法 分离大鼠 DPCs,按培养基不同分为传统培养基(conventional medium, CM)组和CDM组,分别在CM和新型CDM中培养,评估两组DPCs细胞表面标记、增殖、迁移、成骨分化潜能;制备SD大鼠牙周骨缺损模型,CM和CDM两组DPCs分别复合胶原凝胶植入缺损区域内,评估两组DPCs在牙周骨缺损中的骨再生修复能力。 结果 在CM和CDM组中,DPCs细胞均显示相似的细胞表面标记;与CM相比,CDM可促进DPCs增殖、克隆形成及细胞迁移(P<0.05);定量PCR显示CDM组DPCs成骨相关基因Runx2、AlpOpn上调(P<0.05);碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, ALP)染色显示CDM组DPCs细胞 ALP活性高于CM组(P<0.05);细胞经成骨诱导后,茜素红染色显示CDM组DPCs细胞成骨分化能力高于CM组(P<0.05)。在大鼠体内牙周骨缺损模型中,移植CDM组DPCs细胞8周后,HE染色显示缺损区域皮质骨连续的新生骨,而CM组新生骨较少,骨皮质仍未愈合,microCT扫描定量分析显示CDM组骨体积分数(BV/TV)高于CM组(P<0.05)。 结论 CDM培养基可促进DPCs增殖和成骨分化能力,为未来细胞治疗中干细胞培养基的选择提供了新的方案。
摘要:
目的 探究白色念珠菌(C. albicans)对变异链球菌(S. mutans)生长及毒力的影响,验证麦角甾醇通路在其中的作用。 方法S. mutans菌株UA159、C. albicans野生型5314单独培养及共培养(体积比1∶1混合)24 h后,检测各组菌液光密度(OD)600 nm值,并利用菌落形成单位(colony-forming units,CFU)计数检测S. mutans浓度,以反映C. albicansS. mutans生长的影响;利用蒽酮法检测生物膜胞外多糖产量,pH计检测菌液产酸能力,以反映C. albicansS. mutans毒力的影响;将不同C. albicans麦角甾醇合成相关通路突变株与S. mutans共培养后,检测突变株对S. mutans生长的影响;利用0 mg/L、0.012 5 mg/L、0.025 mg/L氟康唑抑制C. albicans麦角甾醇合成相关通路,24 h后检测C. albicans野生型和S. mutans在单独培养和混合培养下CFU的变化,以验证该通路作用。 结果 C. albicans野生型与S. mutans共培养后,与S. mutans 单独培养组相比,混合菌液中OD600值和CFU升高(P<0.05),S. mutans胞外多糖产量增加(P<0.05),pH下降更明显(P<0.05)。42株C. albicans突变株与S. mutans共培养后,有14株菌对S. mutans促进生长的作用消失(P<0.05),其中包含6株C. albicans麦角甾醇合成相关通路的突变株,这6株与S. mutans共培养后,菌液中S. mutans的CFU不变或下降。添加0.012 5 mg/L、0.025 mg/L氟康唑抑制麦角甾醇通路后,C. albicans 野生型与 S. mutans混合培养的菌液中,S. mutans的CFU较未添加氟康唑组降低(P<0.05),而C. albicans单独培养组、S. mutans单独培养组的CFU无明显变化(P>0.05),C. albicans野生型与S. mutans混合培养的菌液中C. albicans的CFU也无明显改变(P>0.05)。 结论 C. albicans能通过麦角甾醇相关通路增强S. mutans生长能力及毒力,此过程可被氟康唑抑制,有望成为防治龋病的新策略。
摘要:
目的 研究黄连素与戊间甲酚联合使用对粪肠球菌的抗菌作用。 方法 采用微量肉汤稀释法和活菌菌落形成单位(CFU)分别测定黄连素和戊间甲酚对粪肠球菌的最小抑菌浓度(MIC);悬液定量杀菌试验和死活菌染色检测黄连素和戊间甲酚对浮游和生物膜状态粪肠球菌的杀灭效果;扫描电子显微镜观察黄连素和戊间甲酚对粪肠球菌成熟生物膜结构的影响;CCK-8细胞增殖毒性检测试剂盒和乳酸脱氢酶细胞毒性检测试剂盒测定黄连素和戊间甲酚对人口腔黏膜上皮角质细胞(HOK)的毒性。 结果 黄连素的MIC为512 μg/mL,戊间甲酚的MIC为0.023 3%;悬液定量杀菌试验表明,512 μg/mL黄连素或0.002 33%戊间甲酚单独使用时对浮游状态粪肠球菌杀灭效果较弱,但二者联合使用时表现出协同抗菌作用;死活菌染色和扫描电子显微镜结果表明二者联合使用时对生物膜状态粪肠球菌杀灭效果较弱,但可影响生物膜结构;512 μg/mL黄连素和0.002 33%戊间甲酚单用(或联用)处理HOK细胞时,其存活率远大于损伤率,细胞毒性较低。 结论 黄连素与戊间甲酚对粪肠球菌具有协同抗菌作用,且生物安全性较好。
摘要:
目的 探索口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma, OSCC)组织中蛋白激酶D(protein kinase D, PKD)1、2、3的表达情况及其与口腔鳞癌分化程度的关系。 方法 收集10例正常口腔上皮组织、40例OSCC组织样本,采用免疫组化SP法检测PKD1、PKD2和PKD3的表达,评判阳性细胞比率及对染色强度进行评分,分析不同分化程度的OSCC组织中PKD1、PKD2和PKD3间的差异性,并分析PKD1、PKD2和PKD3免疫组化染色评分与OSCC分化程度的相关性。 结果 PKD1和PKD3在OSCC组织中高表达;不同分化程度的OSCC组织中,PKD1、PKD2及PKD3免疫组化染色评分间差异均有统计学意义(P<0.001);PKD1和PKD2的免疫组化染色评分与OSCC分化程度呈负相关关系(r分别为−0.574和−0.341, P<0.001)。 结论 不同分化程度的OSCC组织中,起主导作用的PKDs可能存在差异;PKD1和PKD2的表达水平与OSCC的分化程度存在相关性,OSCC分化程度越低,PKD1及PKD2的表达越高。
摘要:
口腔的适宜环境为微生物定植提供了条件,而口腔微生物是诱发口腔感染性疾病的重要原因,针对病原微生物的治疗是控制口腔感染性疾病的有效策略。青蒿素是从传统中医药黄花蒿中提取出的倍半萜内酯类化合物,由于其具高效低毒的抗疟效果而成为间日疟、恶性疟和抗氯喹疟疾治疗的首选药物。近年来,青蒿素已被证实具有抗细菌、真菌、病毒、其他寄生虫、肿瘤等效果,而部分微生物与口腔疾病密切相关,因此本文将对青蒿素及衍生物在口腔相关微生物方面的作用效果进行综述,总结分析之前的成果及进展,为深入研究提供参考,并展望新的研究方向。完善现有技术及标准以明确青蒿素及衍生物对效果存在争议的微生物的作用,扩大对口腔感染性疾病相关微生物的检测,在抗真菌领域明确与现有抗真菌药物的相互作用,这几个方向有待深入研究。另外在抗口腔感染性疾病研究过程中,青蒿素及衍生物的给药方案、潜在药物相互作用、毒副作用等方面是深入研究的必要条件,也是研究的新方向。随着制作工艺的成熟、相关研究的完善与口腔感染性疾病治疗潜在需求,青蒿素及衍生物在口腔微生物领域拥有广阔的发展前景,也为口腔相关药物的研发提供了新的契机。
摘要:
种植体周围炎是口腔种植修复最常见和棘手的并发症,是影响种植修复远期效果,导致种植失败的主要原因之一。由于研究手段的局限,其发病机制及病理过程尚未明确。动物模型是研究疾病发病机制的重要工具,随着种植技术的日臻成熟,种植体周围炎小鼠模型开始被用于基础实验研究。本文将结合国内外学者近年的研究进展,从小鼠模型的优势、小鼠品系的影响、微种植体的设计、微种植体植入的方式以及小鼠种植体周围炎的诱导方式五个方面进行综述,旨在为相关研究者提供参考和帮助。与种植体周围炎大动物模型相比,种植体周围炎小鼠模型使用更加灵活,较低的成本可以更好地控制样本量的大小,更短的建模时间可以更好地控制实验周期,小鼠基因组测序的完成,以及遗传操作系统的成熟使其发病机制的研究成为可能。但是,目前种植体周围炎小鼠模型仍存在一定的局限性,比如由于小鼠口腔大小的限制,种植手术操作的难度较大,复杂的干预措施难以实施,且由于种植体周围炎小鼠模型发展时间较短,种植体植入方法、种植体周围炎诱导方法等相关技术理论尚不统一,仍需要进一步地研究夯实理论。
摘要:
Connexins和Pannexins在骨细胞和成骨细分化、细胞内信号转导、维持骨平衡以及骨再生中起着重要作用。本文就Connexins介导的缝隙连接及Pannexins介导的半通道在骨中的研究进展和局限性进行综述。目前的研究已经阐明这些分子以缝隙连接的形式或是独立的半通道的形式传递外界刺激到骨骼系统。然而,对于Connexins和Pannexins家族成员在骨发育和骨稳态中其他类型细胞如成骨细胞前体、骨髓间充质干细胞等,在维持正常生物学行为中的作用所知甚少。此外,目前Connexins家族中研究最多的成员是Connexin43 (Cx43),其他成员在骨骼发育中的作用与机制尚缺乏研究。基因编辑动物模型为研究Connexins和Pannexins在骨骼系统中的作用提供了基本的信息,但是 Connexins和Pannexins之间的异同仍然有待发现。将一种特定功能定位于Connexins或Pannexins对骨作用刺激和骨骼疾病的影响仍然是一个难题,其困扰是通道之间药理选择性重叠、其他亚型的补偿、评估通道功能的方法差异,以及与转基因小鼠模型相关的基因改变。因此,需要更好的工具和研究途径来了解这些通道在骨和软骨中的作用。未来研究的一个基本任务是找到特定的可以调节Connexins或Pannexins亚型的化合物,使其能够作为药物制剂治疗骨骼疾病,为改善骨骼健康、治疗骨骼系统的疾病开发新的治疗策略提供可能。
摘要:
骨髓间充质干细胞的成骨分化受到多条信号通路调控,直接或间接影响矮小相关转录因子2(runt-related transcription factor 2, Runx2)和成骨细胞特异性转录因子(osterix, Osx)等成骨关键转录因子的表达,在骨的发育与再生、骨的修复重建过程中发挥了关键作用。这些通路各自发挥其作用机制,但又相互交织关联构成了一个复杂的信号调控网络,但由于研究手段的局限,成骨分化相关信号通路的具体作用机制仍不明了,若能阐明这些不同的信号通路各自发挥其作用的相关机制及各条通路之间的相互关系,对成骨分化的机制研究具有重要的意义。本文将对各种信号通路在骨髓间充质干细胞成骨分化调控研究中所取得的进展做一综述。
摘要:
目的 探究鱼精蛋白硫酸盐对四面体框架核酸入胞能力及胞内稳定性的影响。 方法 取3日龄C57BL小鼠肢端软骨进行软骨细胞培养,并收集第1~2代细胞用于实验。利用4条DNA单链S1(标记Cy5荧光)、S2、S3、S4,经过退火程序合成四面体框架核酸并超滤提纯。用高通量毛细电泳验证四面体框架核酸合成并拍摄透射电镜图进行表征。向新合成四面体框架核酸中缓慢滴入1 mg/mL鱼精蛋白硫酸盐溶液(以原子数N/P=5/1混合),检测Zeta电位。将细胞分为3组:细胞中加入100 nmol/L经过鱼精蛋白硫酸盐孵育的四面体框架核酸作为实验组1;细胞中加入100 nmol/L未经孵育处理的四面体框架核酸为实验组2;对照组细胞不进行加药处理。在加药后6 h及12 h,用流式细胞术定量检测胞内Cy5荧光,并取部分12 h组细胞,进行免疫荧光染色,于激光共聚焦显微镜下定性观察分析胞内Cy5荧光。加药5.5 h及11.5 h后,加入溶酶体探针对活细胞溶酶体进行染色,30 min后(6 h及12 h)观察Cy5荧光与溶酶体位置关系。 结果 经过鱼精蛋白硫酸盐孵育处理后,溶液Zeta电位由负转正,即由(-1.567±0.163) mV转为(4.700±0.484) mV;在6 h及12 h两个时间点,流式细胞仪检测到实验组1胞内四面体框架核酸荧光强度均高于实验组2,差异有统计学意义(P<0.05)。12 h的免疫荧光染色观察结果与流式细胞术检测结果一致。溶酶体染色结果显示,加药6 h及12 h后,实验组1的Cy5荧光与溶酶体位置重叠现象较实验组2更少;且12 h后,实验组1依然可见大量Cy5荧光,而实验组2的Cy5荧光较少较弱。 结论 鱼精蛋白硫酸盐孵育处理可有效提升四面体框架核酸入胞能力,并在一定程度上实现四面体框架核酸胞内溶酶体的逃逸。
摘要:
目的 阐述Smad7对瘢痕疙瘩角质形成细胞上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)的影响。 方法 培养瘢痕疙瘩角质形成细胞(KK细胞)和正常皮肤角质形成细胞(NK细胞),构建Smad7过表达慢病毒载体及Smad7干扰慢病毒载体,筛选最佳过表达和干扰慢病毒以及对照载体分别感染NK和KK细胞,嘌呤霉素筛选稳定表达细胞株,将培养细胞分为8组:NK-Control(正常培养的NK细胞);NK-NC(对照慢病毒筛选的NK细胞);NK-shSmad7(干扰慢病毒筛选的NK细胞);NK-mSmad7(过表达慢病毒筛选的NK细胞);KK-Control(正常培养的KK细胞);KK-NC(对照慢病毒筛选的KK细胞);KK-shSmad7(干扰慢病毒筛选的KK细胞);KK-mSmad7(过表达慢病毒筛选的KK细胞)。CCK-8法观察细胞的增殖情况,流式细胞仪检测细胞的凋亡,Transwell小室检测细胞的迁移能力,Western blot检测上皮-间质转化的关键蛋白(N-cadherin和Occludin)表达情况。 结果 成功构建Smad7干扰慢病毒载体和Smad7过表达慢病毒载体。干扰Smad7可促进NK细胞和KK细胞增殖和迁移能力,并抑制KK细胞的凋亡,但对NK细胞的凋亡无明显影响(P>0.05);过表达Smad7可抑制NK细胞和KK细胞的增殖和迁移能力,并促进其凋亡。干扰慢病毒感染后,与NC组比较,NK细胞和KK细胞Occludin蛋白表达减弱(P<0.01),KK细胞N-cadherin蛋白表达增多(P<0.01),但NK细胞N-cadherin蛋白表达无明显变化(P>0.05);过表达慢病毒感染后,与NC组比较,NK和KK细胞Occludin蛋白表达增多(P<0.05),NK细胞的N-cadherin蛋白表达降低(P<0.05),但KK细胞N-cadherin蛋白表达无明显变化(P>0.05)。 结论 Smad7基因的调节可以影响正常皮肤角质形成细胞和瘢痕疙瘩角质形成细胞中的EMT,进而调控细胞的增殖、迁移、凋亡的能力。Smad7基因的调节对瘢痕疙瘩角质形成细胞中EMT的影响大于对正常皮肤角质形成细胞中EMT的影响。