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原发性醛固酮增多症诊断进展
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原发性醛固酮增多症(primary aldosteronism,PA)是最常见的继发性高血压病因,其诊断包括筛查、确诊和分型三部分。指南推荐PA筛查首选血浆醛固酮浓度(PAC)与肾素活性(PRA)之比(ARR),确诊推荐氟氢可的松试验、生理盐水输注试验、卡托普利试验或口服高钠饮食,分型推荐肾上腺静脉采血(adrenal venous sampling, AVS),但研究发现上述每个诊断步骤均存在不足。目前国内外众多研究者正积极探索诊断效能更高且更简便的筛查指标、功能试验、影像学及病理组织学方法等。我们发现在筛查诊断中,纳入立位PAC、立位PRA和最低血钾的回归模型的优于ARR;生理盐水输注试验后血钾和钠钾比值对PA分型诊断的敏感性较低,诊断价值有限。本文将对PA诊断技术的研究及进展做详细评述。
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目的 探讨不同方法对原发性醛固酮增多症(PA)的筛查价值。 方法 回顾性分析2009−2018年华西医院确诊的499例PA和479例原发性高血压患者的临床资料。通过绘制受试者工作特征(ROC)曲线,比较不同筛查方法的诊断效能。 结果 立位血浆醛固酮(PAC)与血浆肾素活性(PRA)之比(ARR)的ROC曲线下面积(AUC)大于立位PAC与血管紧张素Ⅱ(AT-Ⅱ)之比(AA2R)、立位PRA、立位PAC、卧位ARR和最低血钾(P<0.05);在ROC曲线中,多因素logistic回归建立的模型(低血钾水平、立位PRA和立位PAC)用于诊断PA的AUC大于单一指标立位ARR(96.3% vs. 94.6%,P<0.05);决策树模型(分数最高的前五个变量依次为立位ARR、卧位ARR、立位PRA、卧位PRA、最低血钾水平)与单一指标立位ARR的AUC差异无统计学意义(94.1% vs. 94.6%,P>0.05)。在测试集中,logistic回归模型和决策树模型的AUC差异无统计学意义(96.3% vs. 94.1%,P>0.05)。Logistic回归模型的校准曲线更接近45°线,logistic回归模型的预测概率与实际发生概率的一致性比决策树模型更好。 结论 立位ARR仍为最优的单个筛查指标;不建议AA2R(放射免疫法)作为PA筛查指标;立位PAC、立位PRA和最低血钾组合的logistic回归模型诊断效能优于立位ARR。
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目的 探索不同亚型原发性醛固酮增多症(primary aldosteronism, PA)的电解质特点,及盐水负荷试验(saline infusion test, SIT)后的血钾和钠钾比值在辅助PA分型诊断中的价值。 方法 回顾性分析135例于2009年1月1日−2018年12月27日在四川大学华西医院筛查高血压原因的患者资料,分为原发性高血压(essential hypertension, EH)组(34例)、PA组(101例),其中PA组包括60例单侧肾上腺分泌〔醛固酮瘤(aldosterone-producing adenoma, APA)组〕和41例双侧肾上腺分泌〔特发性醛固酮增多症(idiopathic hyperaldosteronism, IHA)组〕。以受试者工作特征(ROC)曲线分析SIT后的血钾和钠钾比值对PA分型诊断的价值。 结果 与EH组比较,APA组患者SIT前后血钾水平均较低(P<0.01),APA组SIT前后的钠钾比值均较高(P<0.05)。虽然APA组和IHA组间SIT前血钾和钠钾比值均无明显差异,但APA组SIT后的血钾水平较IHA组更低(P<0.01),钠钾比值与IHA组相比更高(P<0.05)。在PA分型诊断中,SIT后血钾水平和钠钾比值ROC曲线下面积(AUC)分别为0.641和0.646,均低于SIT后醛固酮水平的0.788。SIT后血钾取最佳切点为3.56 mmol/L时,其敏感度及特异度分别是46.7%、85.4%,SIT后钠钾比值取最佳切点为39.09时,其敏感度和特异度分别是53.3%、80.5%。 结论 SIT后血钾和钠钾比值对PA分型诊断的敏感性较低,诊断价值有限。
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目的 通过对2009−2018年四川大学华西医院所有原发性醛固酮增多症(primary aldosteronism, PA)住院病例的分析,了解本区域内10年来PA诊治的发展变化趋势。 方法 所有研究对象均来自四川大学华西医院住院患者,实际时间跨度为2009年1月1日至2018年12月31日。以ICD-10(GBT 14396-2016国家标准)诊断为依据,筛选出诊断中包含“原发性醛固酮增多症”的所有住院病例作为研究对象,分析10年来PA患者基本特征、历年诊断例次、入出院情况、诊治科室、就诊主诉及变化、诊断及治疗方式等。 结果 共853例患者1 248例诊断例次纳入分析。2009−2018年以来PA诊断例次逐年显著增加,大部分患者(74.33%)经由内分泌代谢科进行诊断。患者中女性多于男性,比例约为1.34∶1。高血压是最重要的入院主诉,而乏力和(或)麻木等低血钾症状作为主诉的占比逐年减少,肾上腺意外瘤作为主诉逐渐增多。通过卧位盐水负荷试验、卡托普利试验和肾上腺静脉采血进行确诊和分型诊断的患者数逐年增加,2016年后大幅增长。单纯手术治疗所占比例逐年下降,更多患者采用了内科治疗方式或经内科确诊后转入外科进行联合治疗。 结论 2009−2018年,四川大学华西医院对PA的重视加强、诊治流程不断规范以及多学科联合诊治团队的建立均使得PA的诊断率提高。高血压是PA患者最重要的临床表现,应加强在高血压人群中PA的筛查。此外,肾上腺意外瘤成为PA首发表现呈增多趋势,需要引起重视。
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目的 探讨原发性醛固酮增多症(PA)中醛固酮瘤(APA)和特发性醛固酮增多症(IHA)合并阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征(OSAHS)的临床特征及OSAHS对APA及IHA患者肾素-血管紧张素-醛固酮系统(RAAS)的影响。 方法 回顾性分析2010年5月至2019年8月在四川大学华西医院确诊为PA患者(127例)的临床资料,其中APA(70例)及IHA(53例)患者根据多导睡眠监测结果,将其分为合并OSAHS(APA-、IHA-OSAHS患者共96例)组和未合并OSAHS(APA-、IHA-nonOSAHS患者共27例)组。OSAHS根据睡眠呼吸暂停低通气指数(AHI)分为轻、中、重度亚组。对APA、IHA合并与未合并OSAHS组患者的临床特征、生化指标及血浆肾素活性、醛固酮水平、醛固酮与肾素活性比值(ARR)进行比较。 结果 ① 127例PA患者中APA患者占55.1%(70例),IHA患者占41.7%(53例),原发性肾上腺皮质增生(PAH)患者占3.2%(4例)。PA-OSAHS患者99例,占78.0%,其中APA-OSAHS患者49例,占APA患者的70.0%(49/70),IHA-OSAHS患者47例,占IHA患者的88.7%(47/53)。②APA-OSAHS组年龄、男性构成比、体质量指数(BMI)、腰围、三酰甘油、血尿酸、血肌酐均高于APA-nonOSAHS组(P<0.05),高密度脂蛋白、估算肾小球滤过率(eGFR)低于APA-nonOSAHS组(P<0.05);IHA-OSAHS组BMI和腰围高于IHA-nonOSAHS组(P<0.05)。③中重度OSAHS-APA患者与轻度或无OSAHS-APA患者比较,血浆肾素活性水平升高,ARR值降低(P<0.05);中重度OSAHS-IHA组与轻度或无OSAHS-IHA组比较,血浆肾素活性、醛固酮水平及ARR值差异均无统计学意义。 结论 在PA患者中,OSAHS患病率高于正常人群,且OSAHS会加重PA患者的糖脂及尿酸代谢异常。中重度OSAHS可使APA患者肾素水平升高、ARR值降低,但对IHA患者RAAS系统影响不显著。
论  著
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目的 TRAIL-Mu3是通过将野生型肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)的N端突变为8个连续的精氨酸(第114~122位氨基酸)得到的可溶性蛋白突变体。本研究在前期药物构建和制备已经完成的基础上进一步对TRAIL-Mu3蛋白的体内外药效和机理进行初步探索。 方法 采用CCK-8法检测TRAIL-Mu3对肺癌细胞株NCI-H460、A549、NCI-H1299、calu-1的增殖抑制作用,通过流式细胞术(FCM)检测TRAIL-Mu3对A549和NCI-H460细胞凋亡诱导作用,并通过Western blot法检测体外凋亡相关蛋白死亡受体4(death receptor 4, DR4)、死亡受体5(death receptor 5, DR5)、Caspase-3、Caspase-8、X连锁凋亡抑制蛋白(X-linked inhibitor of apoptosis protein, XIAP)的表达情况。建立肺癌细胞株NCI-H460荷瘤小鼠移植瘤模型,TRAIL-Mu3给药方式为尾静脉注射,给药频率分为每日注射1次、隔日注射1次、每周注射3次,观察不同给药频率对移植瘤模型的治疗效果,并进行免疫组织化学法检测肿瘤组织凋亡相关蛋白DR4、DR5、Caspase-3、Caspase-8、XIAP的体内表达情况。 结果 通过细胞增殖及凋亡检测等体外实验证实TRAIL-Mu3较野生型TRAIL表现出更强的体外肿瘤细胞毒性和凋亡诱导能力,并可在体外上调DR4、Caspase-3、Caspase-8的表达或活化(P<0.05)。动物实验结果显示,TRAIL-Mu3隔日给药与每周3次给药抑制作用相近,优于每日给药(P<0.05),但3种给药方案均可显著抑制荷瘤小鼠移植瘤的生长。免疫组化结果表明其可在体内上调DR4、Caspase-3的表达或活化,下调XIAP的活化(P<0.05)。 结论 突变体TRAIL-Mu3通过上调死亡受体DR4的表达、增加凋亡相关蛋白Caspase-3/-8的活化、减少XIAP的活化而展现出良好的体内外抑瘤效果。
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目的 研究短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)沉默结肠癌相关转录因子2(colon cancer associated transcript 2, CCAT2)对非小细胞肺癌耐顺铂(cisplatin,DDP)细胞株(A549/DDP)的增殖、侵袭和凋亡以及体内肿瘤形成的影响。 方法 shRNA-CCAT2(sh-CCAT2)或shRNA-阴性对照(shRNA-NC)转染A549/DDP细胞(并设未经处理的A549/DDP细胞为对照组),通过实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)检测3组A549/DDP细胞CCAT2 mRNA表达;通过MTT实验检测3组A549/DDP细胞经过不同质量浓度(0~8 mg/L)DDP处理后的增殖能力变化,并依此选定2 mg/L DDP进行后续实验。采用克隆形成实验、流式细胞法、Transwell实验检测2 mg/L DDP处理对各组细胞(并设未经处理的A549/DDP细胞为对照组)增殖、凋亡、侵袭的影响,用Western blot检测各组细胞增殖标记蛋白〔Ki67蛋白、增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)〕、凋亡标记蛋白(Caspase-3、Caspase-9)、侵袭标记蛋白〔血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、基质金属蛋白酶-14(matrix metalloproteinase-14,MMP-14)〕蛋白的表达。裸鼠皮下注射A549/DDP细胞、转染shRNA-NC和转染sh-CCAT2的 A549/DDP细胞,每3 d腹腔注射DDP 2 mg/kg,连续给药7次,另设对照组(皮下注射A549/DDP细胞,腹腔注射等量生理盐水)。检测每5 d肿瘤体积,共30 d。30 d后处死取肿瘤组织,RT-PCR检测CCAT2 mRNA表达,TUNEL染色检测肿瘤细胞凋亡。 结果 与对照组和shRNA-NC转染组相比,sh-CCAT2转染A549/DDP细胞后,细胞CCAT2 mRNA表达降低(P<0.01),2~8 mg/L DDP作用后细胞增殖抑制更明显(P<0.01)。与对照组相比,DDP处理的3组细胞克隆形成减少,增殖标记蛋白Ki67和PCNA表达减少(P<0.01);细胞凋亡率增加,凋亡标记蛋白Caspase-3和Caspase-9表达增多(P<0.01);细胞侵袭数目减少,侵袭标记蛋白VEGF和MMP-14表达降低(P<0.01);DDP处理的3组细胞中,sh-CCAT 2转染的细胞上述表现最为明显(P<0.01)。体内实验显示,与对照组相比,3个DDP组肿瘤体积减小,30 d时差异有统计学意义(P<0.01);肿瘤组织CCAT2 mRNA表达减少(P<0.01),细胞凋亡增加(P<0.01)。3个DDP组中,接种sh-CCAT2转染的 A549/DDP细胞组上述表现最为明显(P<0.01)。 结论 sh-CCAT2可以抑制A549/DDP细胞的增殖、诱导细胞凋亡和降低细胞的侵袭能力,从而抑制A549/ DDP细胞生长。
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目的 探究小干扰RNA(siRNA)沉默X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)基因表达对人耐紫杉醇卵巢癌细胞耐药性的逆转。 方法 36只BALB/C-nu雌性裸鼠皮下接种人耐紫杉醇卵巢癌细胞株A2780/T,建立耐紫杉醇卵巢癌裸鼠移植瘤模型,再随机分为6组(每组6只),A组:生理盐水组;B组:紫杉醇组;C组:siRNA-阴性对照(siRNA-NC)+生理盐水组;D组:siRNA-NC+紫杉醇组;E组:siRNA-XIAP+生理盐水组;F组:siRNA-XIAP+紫杉醇组。待接种处形成粟粒大小的移植瘤时,C~F组于瘤体处注射 siRNA-XIAPsiRNA-NC,注射剂量为每次每只裸鼠10 μg,每3 d注射1次,共注射9次。在D、F组第1次siRNA干扰后开始按裸鼠体质量给予2 mg/kg紫杉醇(C、E组注射生理盐水),每周1次,0.2 mL/次,腹腔内注射,共注射4次。A、B组不给予siRNA干扰,只进行紫杉醇或者生理盐水腹腔注射。siRNA处理27 d后处死裸鼠,取出瘤体测质量,计算抑瘤率;采用实时荧光定量PCR和Western blot分别检测各组移植瘤细胞中XIAP的基因和蛋白表达水平;TUNEL法检测各组移植瘤细胞的凋亡情况。 结果 转染阴性对照序列的生理盐水治疗(C组)抑瘤率最低、肿瘤质量最高、治疗效果最差,仅使用紫杉醇治疗(B组)、仅转染阴性对照序列的紫杉醇治疗组(D组)、仅沉默XIAP而不使用紫杉醇治疗(E组)三者效果相当,沉默XIAP且使用紫杉醇治疗组(F组)抑瘤率最高,治疗效果最好(P<0.05)。沉默XIAP后,F组与E组XIAP的基因和蛋白表达低于A~D组(P<0.05)。细胞凋亡指数:F组最高,A组及C组最低(P<0.05)。 结论 XIAP的沉默可逆转人耐紫杉醇卵巢癌细胞的耐药,增强紫杉醇的治疗效果。
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目的 观察泛素样含PDH和环指域1 (UHRF1)对雌激素受体(ER)α和ERβ表达比率的影响,探讨UHRF1影响甲状腺乳头状癌BCPAP细胞增殖、侵袭和迁移的机制。 方法 应用Western blot、实时荧光定量(qRT)-PCR检测正常甲状腺细胞Nthy-ori3-1和甲状腺乳头状癌细胞BCPAP中UHRF1、ERα和ERβ的蛋白及mRNA表达。分别用Scrambled siRNA、UHRF1 siRNA处理BCPAP细胞,qRT-PCR检测各组细胞中ERαERβ的mRNA表达;MTT、Transwell分别检测各组细胞增殖、侵袭和迁移。 结果 与Nthy-ori3-1细胞相比,BCPAP细胞中UHRF1和ERα蛋白及mRNA表达水平上调(P<0.05),而ERβ蛋白和mRNA表达水平下调(P<0.05)。与空白对照组和Scrambled siRNA组相比,转染UHRF1 siRNA的BCPAP细胞中ERα mRNA表达降低(P<0.05),ERβ mRNA表达升高(P<0.05);转染UHRF1 siRNA的BCPAP细胞增殖、侵袭和迁移降低(P<0.05)。 结论 UHRF1可上调ERα/ERβ的表达比率,促进甲状腺乳头状癌BCPAP细胞增殖、侵袭和迁移。
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目的 观察压力超负荷诱导的心肌肥厚/心力衰竭小鼠模型中肝肾组织功能有无损伤,以及在此过程中巨噬细胞活化水平的变化。 方法 C57BL/6小鼠通过胸主动脉缩窄术(transverse aortic constriction,TAC)构建压力超负荷诱导的心肌肥厚/心力衰竭小鼠模型,假手术组小鼠主动脉弓不进行结扎。在TAC术后4周(4周TAC组)及8周(8周TAC组),各组小鼠分别进行超声心动图检查、采血及处死小鼠后取小鼠心、肝脏、肾脏组织标本,检测小鼠肝功能〔包括丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase, ALT)、门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase, AST)、总胆红素(total bilirubin, TBil)〕,以及肾功能〔血肌酐(serum creatinine, Scr)〕,小鼠心、肝、肾组织苏木精-伊红染色(hematoxylin-eosin staining,HE)观察病理形态学的改变,免疫组织化学染色法检测心脏、肝、肾组织中巨噬细胞活化的标志物F4/80蛋白的表达变化。 结果 心脏超声检测结果显示,与假手术组相比,4周、8周TAC组小鼠心功能指标中左室舒张末期后壁厚度(left ventricular end-diastolic posterior wall thickness, LVPWd)、左室内径(left ventricular internal diameter in diastole, LVIDd)升高,左室射血分数(left ventricular ejection fraction, EF%)和左室短轴缩短率(left ventricular fractional shortening, FS%)均下降(P<0.05)。与假手术组比较,4周、8周TAC组小鼠血ALT、AST、TBil及Scr含量均升高(P <0.05);HE染色显示4周TAC组小鼠肝组织即出现空泡化、肝窦轻度充血、炎性浸润等病理改变,8周TAC组小鼠肝损伤更加显著。TAC小鼠肾组织亦有轻微损伤表现,如肾小球轻度损伤,轻微出血。F4/80蛋白免疫组织化学染色结果显示,与Sham组比较,4周及8周TAC组小鼠心脏、肝脏的巨噬细胞活化增强(P <0.005),而肾脏中巨噬细胞活化水平无明显差异。 结论 压力超负荷诱导的心肌肥厚/心力衰竭小鼠有肝肾损伤发生,此过程有巨噬细胞参与。
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目的 研究氢溴酸加兰他敏(galantamine hydrobromide lycoremine,Gal)介导腺苷酸激活蛋白激酶(AMPK)α1/Nrf2/血红素加氧酶 (heme oxygenase-1, HO-1)通路对心肌缺血再灌注(I/R)大鼠内质网应激型凋亡、心肌凋亡和纤维化的影响。 方法 构建心肌I/R损伤大鼠模型,将大鼠随机分为5组:对照组、I/R 模型组、Gal 1 mg/kg组、Gal 2 mg/kg组、Gal 4 mg/kg组进行后续实验。多普勒超声检测各组大鼠左室射血分数(LVEF)、左心室舒张末期容积(LVEDV)、左心室收缩末期容积(LVESV)、左心室壁厚度(LVWT)、左室短轴缩短率(FS);HE染色检测心肌组织病理损伤程度;免疫组化检测Caspase-3阳性表达率;RT-PCR检测心肌Caspase-3 mRNA表达;蛋白免疫印迹检测内质网应激因子CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CCAAT/enhancer-binding protein homologous protein,CHOP)、cleaved Caspase-12、生长抑制和DNA损伤诱导蛋白(growth arrest and DNA damageinducible protein 34,GADD34)、免疫球蛋白重链结合蛋白(immunoglobulin heavy-chain-binding protein, BiP)、α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin, α-SMA )、Collagen Ⅰ、AMPKα1、Nrf2、HO-1蛋白表达水平;并加入AMPK的抑制剂Compound C进行验证。 结果 与I/R 模型组比较,Gal 各组心肌组织病理损伤程度明显改善,cleaved Caspase-3阳性表达率和Caspase-3 mRNA水平表达降低(P<0.05);Gal 2 mg/kg、Gal 4 mg/kg组LVWT、FS、LVEF升高(P<0.05),LVEDV、LVESV降低(P<0.05),CHOP、cleaved Caspase-12、α-SMA、Collagen Ⅰ、AMPKα1、Nrf2、HO-1蛋白表达降低(P<0.05),GADD34、BiP蛋白表达升高(P<0.05)。加入AMPK抑制剂Compound C后,与I/R模型组相比较,CC 组AMPKα1、Nrf2、HO-1、BiP蛋白水平降低(P<0.05),CHOP、α-SMA、Collagen Ⅰ蛋白水平升高(P<0.05),LVESV、FS降低(P<0.05),Caspase-3 mRNA水平升高(P<0.05)。与CC组比较,CC+Gal 4mg/kg组AMPKα1、Nrf2、HO-1、BiP蛋白水平升高(P<0.05),CHOP、α-SMA、Collagen Ⅰ蛋白水平降低(P<0.05),LVESV、FS升高,Caspase-3 mRNA水平降低(P<0.05)。 结论 氢溴酸加兰他敏介导AMPKα1/Nrf2/HO-1通路可调节心肌缺血再灌注大鼠内质网应激型凋亡、心肌凋亡和纤维化。
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目的 探讨骨髓干细胞动员抑制大鼠心肌纤维化的机制与转化生长因子(TGF-β)介导的非经典通路的关系。 方法 22只Wistar大鼠通过皮下注射异丙肾上腺素(isoproterenol,Iso)建立心肌纤维化模型后,随机分为对照组(Con组)和动员组(GT组),GT组大鼠皮下注射重组人粒细胞刺激因子(rhG-CSF),连续注射5 d,对照组同期皮下注射生理盐水。末次注射4周后,行HE和Masson染色观察两组大鼠心肌结构,ELISA法检测血清B型利钠肽(BNP)质量浓度,免疫组化染色观察心肌组织中Ⅲ型胶原表达,Western blot检测组织Ⅰ型胶原、TGF-β、转化生长因子激酶1( TAK1 )、丝裂原活化蛋白激酶激酶(MKK)、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)的蛋白水平。 结果 与对照组相比,GT组大鼠血清BNP质量浓度降低(P<0.01);Masson染色胶原沉积减少,胶原面积比值下降(P<0.01);Western blot检测Ⅰ型胶原、TGF-β、TAK1、MKK3、p38MAPK表达较对照组均降低(P<0.05)。 结论 骨髓干细胞动员可改善大鼠心肌纤维化的程度,这种抗心肌纤维化的作用与抑制TGF-β/TAK1/MKK/p38MAPK通路有关。
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目的 探究急性心肌梗死后心肌细胞内质网应激反应与线粒体损伤的变化趋势,以期进一步了解急性心肌梗死后心肌细胞损伤的具体机制。 方法 32只SD大鼠建立急性心肌梗死大鼠模型,分别在造模后1 h 、2 h 、4 h和6 h时各处死8只大鼠,收集心肌组织;对照组(n=8)除未结扎心脏左冠状动脉前降支主干外,余处理均同模型组,处理后6 h时收集心肌组织。通过荧光定量PCR技术检测心肌细胞中激活转录因子6(activating transcription factor 6,ATF6)、免疫球蛋白重链结合蛋白(immunoglobulin heavy chain binding potein,BiP)的mRNA水平和线粒体DNA水平,采用试剂盒检测心肌细胞ATP水平。 结果 ATF6和BiP的mRNA水平在急性心肌梗死后1 h即出现明显升高,并在2 h及以后维持在较高水平(P<0.05)。心肌细胞ATP水平在急性缺血2 h时出现明显升高,而在4 h及以后出现下降,并低于正常水平(P<0.05)。心肌细胞细胞质中线粒体DNA水平在急性心肌梗死2 h后开始出现明显升高,在4 h和6 h时持续升高(P<0.05)。 结论 急性心肌梗死后线粒体的损伤可能继发于内质网应激反应。
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目的 研究转录因子性别决定区Y框蛋白11(SRY-related HMG box 11, SOX11)、配对盒基因5(paired box domain 5, PAX5)在套细胞淋巴瘤(mantle cell lymphoma,MCL)患者病理组织标本中的表达,分析它们之间的关系及临床意义。 方法 纳入2012年1月—2017年8月诊断的76例MCL患者为研究对象,并以56例弥漫大B细胞淋巴瘤(diffuse large B cell lymphoma,DLBCL)、38例滤泡性淋巴瘤(follicular lymphoma,FL)、9例伯基特淋巴瘤(burkitt's lymphoma,BL)患者为对照。采用实时荧光定量PCR和免疫组化法检测所有患者病理组织标本中SOX11、PAX5基因和蛋白表达水平,分析MCL患者病理组织标本SOX11与PAX5表达的相关关系,以MCL患者SOX11及PAX5蛋白表达的中位H评分为依据,将其分为高低表达组,分析SOX11及PAX5蛋白表达与临床特征及预后的关系。 结果 SOX11、PAX5 mRNA在不同淋巴瘤组织标本中的表达差异有统计学意义(P均<0.01),在MCL患者病理组织标本中SOX11、PAX5 mRNA表达高于其他淋巴瘤组织,两两比较,MCL与BL间差异无统计学意义(P>0.05),与DLBCL及FL间差异有统计学意义(P均<0.01),且MCL患者病理组织标本中SOX11蛋白表达水平高于3个对照组(P均<0.000 1),PAX5蛋白表达与对照组间差异无统计学意义(P>0.05);在MCL患者病理组织标本中SOX11和PAX5在mRNA水平(rs=0.714, P<0.000 1)和蛋白水平(G=0.407, P=0.01)均存在正相关关系。未发现SOX11、PAX5高低表达组与MCL患者临床特征和总生存期有关。 结论 在MCL中SOX11和PAX5表达呈正相关。单独的SOX11或PAX5表达在MCL患者预后分层中的作用不显著。
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目的 探讨卵泡抑素相关基因(follistatin related-gene, FLRG)在结肠癌中的表达及其与结肠癌临床病理特征的关系。 方法 选取2018年12月—2019年12月收治的行根治性手术的结肠癌患者的肿瘤组织、癌旁及正常组织各80例,采用免疫组织化学染色及实时荧光定量PCR方法检测FLRG的表达,并分析其表达水平与结肠癌病理特征的关系。 结果 FLRG在结肠癌组织中的表达高于癌旁组织及正常组织,在癌旁组织中的表达高于正常组织,差异均有统计学意义(P<0.05)。FLRG的表达在结肠癌患者不同性别、不同年龄、不同肿瘤生长位置及分化程度间无明显差异(P>0.05),结肠癌伴远处转移的患者FLRG表达水平高于无远处转移患者(P<0.05),临床分期较晚的患者FLRG表达水平高于临床分期较早的患者(P<0.05)。 结论 FLRG在结肠癌组织中表达上调,可能参与肿瘤发生发展的调控,是潜在的预后靶点。
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目的 研究下调表达葡萄球菌核酸酶和tudor结构域1(staphylococcal nuclease and tudor domain containing 1, SND1) 对人二倍体成纤维细胞衰老的影响,并探讨其相关机制。 方法 Western blot和免疫组化分别检测SND1在年轻及衰老2BS细胞(博来霉素诱导2BS细胞老化)和老年组织(人结肠腺瘤组织)中的表达情况;免疫荧光检测SND1在年轻2BS细胞中的定位;CCK8和EDU分析检测2BS的增殖能力;集落形成分析评价2BS集落形成能力;表达芯片和RT-qPCR分析衰老相关分泌表型(SASP)表达改变;β半乳糖苷酶染色用于显示衰老的2BS细胞。 结果 SND1在衰老2BS细胞中的表达较年轻2BS细胞显著下调,且在人结肠腺瘤组织中的表达较非病变结肠组织明显下调。在年轻的2BS中,敲低SND1抑制2BS增殖和克隆形成,并出现增强的衰老相关β半乳糖苷酶染色(P<0.05)。表达芯片检测结果和RT-qPCR分析表明敲低SND1上调了SASP成分(P<0.05)。 结论 本研究结果表明下调的SND1通过上调SASP表达来调控人二倍体细胞衰老。
摘要:
目的 观察人参皂苷Rg1联合抗生素亚胺培南对脓毒症急性肺损伤的影响。 方法 C57BL/6雄性小鼠以盲肠穿刺法建立脓毒症模型,将模型小鼠随机分为模型组、亚胺培南组、人参皂苷Rg1组、人参皂苷Rg1+亚胺培南组,每组10只。另取10只C57BL/6小鼠只开腹不穿刺,作为假手术组。各组于术后2 h、26 h、50 h腹腔注射给药。末次给药2 h后(术后52 h),取小鼠动脉血液测定氧合指数,取肺组织测定肺脏湿/干质量比,HE染色观察肺脏炎症,ELISA测试盒检测肺泡灌洗液白介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α及核转录因子(NF)-κB的水平,蛋白印迹及免疫组织化学染色检测肺组织NF-κB p65的表达。 结果 各给药组均能够显著降低脓毒症小鼠的肺脏湿/干质量比,并升高血液中的氧合指数(P<0.01),降低肺泡灌洗液中IL-1β、IL-6、TNF-α及NF-κB水平(P<0.01),同时降低肺组织中NF-κB p65的表达(P<0.01)。人参皂苷Rg1合并亚胺培南应用时,与单用人参皂苷Rg1及单用亚胺培南组相比,上述指标更接近对照组水平。HE染色结果显示给药治疗后的各组脓毒症小鼠的肺泡炎细胞浸润减轻,联合用药组的肺脏组织形态与假手术组最为接近。 结论 人参皂苷Rg1单用和联用均能够抑制脓毒症小鼠的肺脏炎症,以抗生素治疗脓毒症时或可考虑联合使用。
摘要:
目的 探究四川省高原和平原地区高血压患者血压控制率的差异及其影响因素。 方法 本研究为横断面研究,于2017年5月在四川省成都市晋阳、成华社区医院序贯纳入正在服用降压药物的原发性高血压患者231例,2017年9月在四川省甘孜州九龙县及其周边乡镇纳入正在服用降压药物的原发性高血压患者220例。纳入患者均为40周岁以上。采用统一编制的调查问卷收集研究对象人口学特征、既往病史、家族史、生活方式、认知功能及服药依从性等信息,所有纳入研究的患者均测量诊室血压、心电图、采集血样。按常住地点为高原或平原分层后,采用二分类logistic回归分析血压控制率的影响因素。 结果 平原地区高血压患者血压控制率高于高原地区(19.05% vs. 8.64%),logistic回归分析中,平原组70~80岁组控制率高于40~50岁组(OR=4.037,95%CI:1.269~12.848);有中心性肥胖(OR=0.480,95%CI:0.233~0.987)和血尿酸水平高(OR=0.994,95%CI:0.989~0.998)的患者控制率较低。高原组依从性好(OR=4.793,95%CI:1.407~16.326)、尿酸水平高(OR=1.008,95%CI:1.003~1.012)的研究对象血压控制率更高;而认知功能低(OR=0.234,95%CI:0.071~0.767)的患者血压控制率较低。 结论 平原地区高血压患者血压控制率比高原地区高。平原地区应重点关注中心性肥胖、高尿酸水平、40~50岁患者;高原地区应注意积极提升高血压患者依从性及认知功能。
摘要:
目的 了解成都市老一代农民工健康相关生命质量状况及分布特征,并分析其影响因素,为制定改善老一代农民工健康状况的相关政策提供参考依据。 方法 采用应答推动抽样(RDS)方法于2017年6月至2018年6月抽取成都市1980年前出生的非成都市户籍务工人员(老一代农民工)进行面对面问卷调查,调查内容包括调查对象的人口学特征、工作情况、经济状况、患病情况、居住环境以及健康相关生命质量状况,健康相关生命质量状况采用SF-12量表进行评估。 结果 共调查老一代农民工1 492人。成都市老一代农民工躯体健康总评(physical component summary,PCS)、心理健康总评(mental component summary,MCS)以及健康相关生命质量总分分别为(50.78±7.54)分、(50.67±10.24)分和(101.45±12.34)分。多重线性回归分析显示,年龄大〔标准化回归系数()=−0.061,P=0.026〕、文化程度低(=−0.053,P=0.038)、未婚/离婚/丧偶(=−0.064,P=0.009)、患有慢性病(=−0.156,P<0.001)及两周内患病(=−0.190,P<0.001)是老一代农民工生命质量的不利因素,收入水平高(=0.069,P=0.013)、目前有固定工作(=0.126,P<0.001)、已购买养老保险(=0.055,P=0.027)和居住环境较好(=0.060,P=0.016)是老一代农民工生命质量的保护因素。 结论 成都市老一代农民工生命质量状况总体较好。但应重点关注年龄较大、文化程度较低、年收入水平较低、患有慢性病、未婚/离婚/丧偶、目前无工作和未购买养老保险的老一代农民工,并采取措施改善该部分人群的健康状况。
技术与方法
摘要:
目的 比较探针和抗线粒体蛋白抗体标记细胞及组织中线粒体的效果,为相关研究选取适合的标记方法提供参考。 方法 在经体积分数4%多聚甲醛固定的HepG2细胞中,分别使用100 nmol/L MitoTracker Deep Red探针和抗葡萄糖调节蛋白75(Grp75)抗体标记线粒体;在经体积分数4%多聚甲醛固定的HeLa细胞中,分别使用75 nmol/L、100 nmol/L MitoTracker Deep Red探针和抗Grp75抗体标记线粒体;取人肝组织冰冻切片,经4%多聚甲醛固定后,分别使用150 nmol/L MitoTracker Deep Red和抗Grp75抗体标记线粒体。共聚焦显微镜下观察。 结果 MitoTracker Deep Red探针标记细胞线粒体的效果不如抗Grp75抗体标记清晰,且在HeLa细胞中有非特异性染色,抗体标记可更清楚地反映线粒体的点状和管状分布;在组织中MitoTracker Deep Red探针标记的单个细胞更均匀,标记线粒体的特异性更高,效果优于抗体染色。 结论 在细胞中使用抗Grp75抗体标记线粒体效果更好,能直观反映线粒体的分裂融合状态;在组织中使用MitoTracker Deep Red染色效果更佳。
摘要:
目的 探讨高成功率猪体外循环下房间隔缺损模型的建立及补片修补的方法。 方法 选用20只中华小型猪,雌雄不拘,12~13月龄,体质量45.3~55.7 kg,其中4只用于献血,16只用于造模。全麻气管插管,经右侧第四肋间进胸,导丝引导法行升主动脉插管,心包外法行上下腔静脉插管,建立体外循环,升主动脉不阻断,上下腔静脉阻断,并行循环下打开右房,于卵圆孔处预置缝线弯钳扩张法行房间隔造孔、实验补片植入。 结果 全组猪死亡1只,原因为右心耳结扎牵引暴露时根部意外撕裂出血,余15只顺利完成手术,均成功植入实验补片。1只猪术后低血压,平均压低至38 mmHg(1 mmHg=0.133 kPa),经使用升压药及补充容量缓解;1只猪术中心脏停搏,经心脏按摩后恢复。15只猪饲养6月,均成活。 结论 选用猪作为合适的实验动物,使用成熟规范的手术方法,能保证高成功率地建立实验模型,并成功进行补片修补。
摘要:
目的 在中国健康受试者中,对联邦制药公司生产的速效胰岛素——门冬胰岛素(作为受试制剂)进行人体药代动力学、药效动力学研究,并以丹麦诺和诺德公司生产的门冬胰岛素(商品名:诺和锐®)为参比制剂,评价两种制剂的生物等效性。 方法 招募24例男性健康受试者,对受试者采用自身前后对照、单次剂量、随机、双交叉研究。受试者分别在2个试验日接受试验观察,2次试验间隔时间为7~10 d。受试者按随机数字表法随机分为A、B两组,A组第1次用受试制剂门冬胰岛素,第2次用参比制剂诺和锐®;B组则与A组给药顺序相反。采用正常血糖葡萄糖钳夹技术进行药代动力学和药效动力学研究。 结果 受试制剂门冬胰岛素降糖作用的相对生物利用度(反映降糖作用的有效性)为98.3%±18.8%,反映血药浓度的相对生物利用度为97.3%±8.3%。药代动力学参数血胰岛素峰浓度和0~10 h的血胰岛素浓度曲线下面积90%可信区间分别为88.8%~106%(等效范围70%~143%)和94.0%~100% (等效范围80%~125%),药效动力学参数最高葡萄糖输注率、0~10 h葡萄糖输注率曲线下面积90%可信区间分别为95.5%~113% (等效范围70%~143%)和89.9%~104% (等效范围80%~125%),两种制剂具有生物等效性。试验中1例受试者出现无症状高尿酸血症,余受试者试验前、后各安全性指标均无临床意义的异常值。试验过程中未见有低血糖、过敏反应及注射局部不良反应发生。 结论 受试制剂联邦制药的门冬胰岛素和参比制剂诺和锐®具有生物等效性。
临床医学
摘要:
目的 评估肝内胆管细胞癌(intrahepatic cholangiocarcinoma, ICC)患者围手术期炎症指标与预后的关系。 方法 回顾分析2006年12月−2016年12月期间四川大学华西医院收治的231例 ICC 患者临床资料,对围手术期(术前及术后第3、5天)中性粒细胞与淋巴细胞比率(neutrophil-to-lymphocyte ratio, NLR)、衍生中性粒细胞与淋巴细胞比率(derived neutrophil-to-lymphocyte ratio, d-NLR)、血小板与淋巴细胞比率(platelet-to-lymphocyte ratio, PLR)进行检测和比较。X-tile软件确定术前及术后第3、5天的NLR、d-NLR、PLR的最佳截断值,将所有患者分为高水平组和低水平组,并用Kaplan-Meier曲线分析NLR、d-NLR、PLR水平高低与患者的无病生存(disease free survival,DFS)、总生存(overall survival,OS)的相关性,单因素和多因素Cox回归分析评估它们的预后价值。最后建立预测列线图预测ICC患者预后,并通过一致性指数(C指数)评估列线图的预测准确性。 结果 本研究共纳入231例ICC患者,男性115例,女性116例,年龄<60岁的占多数(57.1%)。有161例患者(69.7%)复发,156例(67.5%)死亡。中位DFS、OS分别为8.9个月和12.5个月。Kaplan-Meier生存曲线示:与患者DFS有关(P<0.05)的有d-NLR和NLR水平(术前,术后第3、第5天),PLR水平(术前);与患者OS有关(P<0.05)的有d-NLR和 PLR水平(术前,术后第3、第5天),NLR水平(术前,术后第3天)。单因素和多因素Cox回归分析示,术前高水平的NLR和d-NLR以及术后第3天高水平NLR是不良DFS的独立影响因素;术前高水平的NLR和d-NLR以及术后第3天高水平NLR是不良OS的独立影响因素;PLR水平则与DFS和OS无关。建立Cox回归模型以及列线图预测ICC患者的DFS和OS,其C指数分别为0.738(95%置信区间:0.699~0.777)、0.778(95%置信区间:0.758~0.818)。 结论 ICC患者术前高水平的NLR、d-NLR及术后第3天高水平NLR预示术后生存差,PLR对ICC预后无指导意义。
摘要:
目的 评估血清异常凝血酶原(DCP)对甲胎蛋白(AFP)阴性(AFP≤20 ng/mL)肝癌诊断价值及其水平与Child-Pugh分级、肿瘤大小、TNM分期、肿瘤分化程度的关系。 方法 回顾性纳入2016年6月−2017年12月在四川大学华西医院确诊为乙肝相关性肝病的住院患者459例,其中肝癌组136例,非肝癌组323例(肝硬化组173例,肝炎组150例)。所有患者血清AFP均≤20 ng/mL。用受试者工作特性 (ROC) 曲线分析血清DCP对AFP阴性肝癌的诊断效能,并分析血清DCP水平与肝癌临床特征间的关系。 结果 与非肝癌组相比,肝癌组男性的比例更高,年龄更大,血清DCP水平更高(中位数,22 mAU/mL vs.159 mAU/mL),差异均有统计学意义(P<0.001)。肝癌组与肝硬化组、肝炎组比较,三组患者在性别比、年龄、AFP、DCP水平等方面的差异均有统计学意义(P<0.001)。肝癌组的DCP水平高于肝硬化组(中位数,19 mAU/mL)和肝炎组(中位数,26 mAU/mL)(P<0.001)。在所有AFP阴性的患者中,以DCP诊断肝癌,其曲线下面积(AUC)为0.858,P<0.05。其诊断的最佳切点值为61 mAU/mL,对应的灵敏度为72.8%,特异度为88.2%,阳性预测值为61.1%,阴性预测值为89.7%。在不同大小肿瘤中,直径>3 cm者DCP水平高于直径≤3 cm者(P<0.05)。在不同TNM分期中,Ⅱ、Ⅲ期DCP水平高于Ⅰ期(P<0.05)。在不同Child-Pugh分级、不同分化程度的肝癌间DCP水平差异无统计学意义(P>0.05)。 结论 DCP对于AFP阴性肝癌有一定诊断价值,其水平升高可能与肝癌的进展相关。
摘要:
目的 研究肝脏移植患者术后血糖变异性与在重症监护室(ICU)发生谵妄的相关性。 方法 回顾性纳入2016年8月−2018年12月期间肝脏移植术后入住ICU的患者,根据是否发生ICU内谵妄将患者分为两组,采集患者指尖血,采用多因素logistic回归进行组间血糖变异性〔以血糖不稳定指数(GLI)作为血糖变异性的参数〕的比较,并运用Cochran-Armitage趋势检验分析血糖变异水平和谵妄发生率之间的线性关系。 结果 研究共纳入242例患者,其中ICU内谵妄发生率为14.9%(36/242)。多因素logistic回归分析发现血糖变异性是肝移植患者术后ICU内谵妄的独立危险因素(P=0.045),结果提示谵妄在血糖变异性较高的患者中更为常见(GLI第四分位组 vs. 第一分位组,比值比5.283, 95%可信区间:1.092~25.550, P=0.038),Cochran-Armitage趋势检验分析发现血糖变异性水平和ICU谵妄率之间存在线性关系,随着血糖变异性水平增加,患者ICU内谵妄发生风险显著增加(P<0.001)。 结论 血糖变异性增加是肝移植术后患者ICU内谵妄的独立危险因素。
摘要:
目的 总结现阶段新型冠状病毒肺炎(coronavirus disease 2019,COVID-19)患者的各种CT肺部表现,为该病的早期诊断提供辅助诊断依据。 方法 搜集四川大学华西医院确诊为COVID-19的23例患者的临床资料及CT图像,对其主要CT表现进行回顾性分析,总结各阶段COVID-19患者CT征象特点。 结果 在23例患者中,病变同时累及双肺的患者占56.5%(13/23),沿支气管血管束分布的患者占69.6%(16/23),分布于双肺外带的患者占65.2%(15/23),累及左/右肺下叶基底部的患者占82.6%(19/23),CT表现为纯磨玻璃密度影者占82.6%(19/23),磨玻璃密度伴实性密度影者占30.4%(7/23),呈现网格状改变的占26.1%(6/23);病变进展期病灶数量增多的患者占54.6%(6/11),病灶范围扩大的患者占63.6%(7/11),病变密度增高的患者占63.6%(7/11);缓解期病灶数量减少的患者占25.0%(4/16),病灶范围缩小的患者占81.3%(13/16),病灶密度减低的患者占62.5%(10/16),出现纤维灶的患者占37.5%(6/16)。对CT进展组(n=11)和缓解组(n=5)患者临床特征进行分析,差异无统计学意义。 结论 CT检查作为COVID-19的重要诊断检查方法,在患者有流行病学史并且在CT上伴有肺炎征象的情况下,相较于病毒核酸检测,有利于疾病的快速诊断。
摘要:
目的 分析任务导向结合生物反馈训练对痉挛型脑瘫(spastic cerebral palsy,SCP)患儿手功能、格塞尔婴幼儿发展量表评分(Gesell)及平衡能力的影响。 方法 选取2016年1月至2018年6月我院收治的66例SCP患儿为研究对象,根据干预方法不同分组,对照组(n=33)采用常规康复治疗,观察组(n=33)在对照组基础上采用任务导向结合生物反馈训练,干预6个月后,比较两组干预前后改良Ashworth量表(MAS),Berg平衡量表(BBS),粗大运动功能量表(GMFM)中站立、行走功能评分,手功能评估量表(AHA),Gesell量表评分,患儿监护人康复治疗满意度。 结果 两组干预后MAS评分均较干预前降低,BBS评分均较干预前升高(P<0.05);观察组干预后MAS评分低于对照组,BBS评分高于对照组(P<0.05);两组干预后站立、行走功能评分均较干预前升高(P<0.05);观察组干预后站立、行走功能评分高于对照组(P<0.05);两组干预后AHA评分、Gesell量表发展商数(developmental quotient,DQ)均较干预前升高(P<0.05);观察组干预后AHA评分、Gesell量表DQ高于对照组(P<0.05);观察组患儿监护人康复治疗满意度(90.91%)高于对照组(60.61%)(P<0.05)。 结论 任务导向结合生物反馈训练应用于SCP患儿,可改善患儿平衡能力与肌痉挛程度,提高患儿手功能与发育水平,改善患儿站立、行走功能,提高患儿监护人康复治疗满意度。
摘要:
目的 探讨消化性溃疡出血内镜治疗失败后,钛夹标记引导经导管栓塞治疗的可行性及临床效果。 方法 纳入2009年2月−2018年10月于四川大学华西医院因消化性溃疡出血内镜治疗失败后行经导管栓塞治疗的33例患者为研究对象,观察内镜治疗失败后行经导管栓塞治疗的临床成功率、30 d死亡率及并发症发生情况。 结果 33例患者内镜检查溃疡出血Forrest分级分别为Ⅰa 8例(24.2%)、Ⅰb 14例(42.5%)、Ⅱa 4例(12.1%)、Ⅱb 7例(21.2%)。8例患者视野差未行内镜治疗,25例患者接受内镜治疗,其中7例初次内镜止血治疗失败,18例内镜下止血成功后发生再出血。内镜治疗失败后距经导管栓塞治疗的平均时间为(35.42±67.54) h。所有患者均行血管造影检查,15例血管造影阴性患者X线下8例可见钛夹标记,钛夹引导下行栓塞治疗,7例未见钛夹标记,其中4例患者接受预防性栓塞治疗;余18例血管造影阳性者均予以栓塞治疗。血管造影阴性的患者钛夹引导经导管栓塞治疗临床治疗成功率为75.0%(6/8),无钛夹引导者临床治疗成功率为为28.6%(2/7),血管造影阳性者经导管栓塞治疗临床治疗成功率为66.7%(12/18)。本研究纳入的患者经导管栓塞治疗总体临床成功率为60.0%,30 d死亡率为20.0%,所有患者均未观察到栓塞治疗相关并发症。 结论 消化性溃疡出血内镜治疗失败患者,钛夹标记引导经导管栓塞治疗是一种行之有效并且安全性高的治疗方式。
摘要:
患者,女,33岁,G4P1+2,以“胚胎移植术后34+4周,皮肤瘙痒5+ d”入院。2+年前该患者因马方氏综合征行第三代试管婴儿,足月顺产一女活婴。此次患者孕期产检时糖耐量实验提示妊娠期糖尿病,经糖尿病医学营养管理及运动控制血糖后,血糖波动于正常范围;孕期心脏超声检查发现主动脉窦部增宽至40 mm,左室收缩功能测值正常。入院前5+ d,患者确诊为“妊娠期肝内胆汁淤积症(轻度)”,入院后根据胚胎移植时间核实孕周为37+2周,修正诊断“妊娠期肝内胆汁淤积症(重度)”。缩宫素激惹试验过程中患者自诉腰背部疼痛,考虑主动脉夹层可能,多学科合作下行剖宫产术,术中行双侧子宫动脉结扎,分娩一活男婴,体质量3 020 g,Apgar评分(娩出后1-5-10 min)为10-10-10分,术中出血量共600 mL。术后行CT血管造影示主动脉夹层动脉瘤(B型)。随访至今,患者无胸闷气促等不适,产后恢复好。